谢海萍++++刘柳毅

[摘要] 目的 建立和提高骨刺胶囊的质量标准。 方法 采用显微鉴别法对骨刺胶囊中的杜仲、牛膝、熟地和续断进行鉴别；采用薄层色谱法（TLC）对骨刺胶囊中的独活、续断、牛膝和当归药材进行定性鉴别。 结果 显微特征明显；建立了独活、续断、牛膝和当归药材的薄层鉴别法，TLC斑点清晰，重现性好，专属性强，阴性对照无干扰。 结论 显微鉴别方法操作简便、准确可靠，耗费少；TLC方法简便可行，结果准确可靠，重复性好，可作为骨刺胶囊的质量控制方法。

[关键词] 骨刺胶囊；质量标准；独活；续断；牛膝；当归

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）07（a）-0009-04

骨刺胶囊是由当归、鹿角胶、龟甲胶、杜仲、怀牛膝、熟地、威灵仙、独活、狗脊、续断等10味中药组成，具有补肾、益精健骨，祛风湿、通经络等功效，临床上主要用于腰及腰部以下部位骨质增生、腰间盘突出症[1-5]。原质量标准为企业标准，收载了杜仲和续断的显微鉴别和杜仲、鹿角胶的理化鉴别和狗脊的薄层鉴别，且原标准的薄层鉴别方法均存在阴性干扰和重现性差等问题，故不可作为本产品的质量控制方法。为了能更加有效地控制骨刺胶囊的质量，笔者对本品质量标准进行修订，删去了原标准中鹿角胶的理化鉴别项和狗脊的薄层色谱鉴别项，对杜仲和续断的显微特征进行了补充和完善，并增加了牛膝和熟地的显微鉴别项和独活、续断、牛膝和当归的薄层色谱鉴别项。结果表明，建立的方法简便、准确，重复性好，为该制剂建立可控的质量标准提供了依据。

1 仪器与试剂

1.1仪器

WFH-203B三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；奥林巴斯显微镜；KQ3200B型超声波清洗器（常熟市双杰测试仪器厂）；JJ300型电子天平（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

独活对照药材（120940-201111）、续断对照药材（121033-201110 ）、牛膝对照药材（121066-201106）、当归对照药材（120917-201014）均购自中国药品生物制品检定所；骨刺胶囊（规格：0.4 g/粒，批号：20130601、20130602、20130603）。薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；薄层层析用硅胶GF254 （青岛海洋化工有限公司）。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

取本品置显微镜下观察：可见胶丝，多散离，呈灰色（图1a-1）；石细胞成群或单个，类圆形、长圆形、类三角形，纹孔明显[6]（图1a-2，杜仲）。薄壁细胞内有大量草酸钙砂晶，使细胞界限不清晰[6]（图1b，牛膝）。另一种薄壁组织的细胞皱缩，内含棕色物质[6]（图1c，熟地）。第三种薄壁细胞呈纺锤形，表面具有斜向交错的细纹理（图1d）；皱缩的薄壁细胞中具有成行排列的草酸钙簇晶[6]（图1e，续断）。

图1 骨刺胶囊粉末图（标尺为50 μm）

a.杜仲的显微鉴别特征（1.胶丝；2.石细胞）；b.牛膝的薄壁细胞显微鉴别特征；c.熟地的薄壁组织显微鉴别特征；d.熟地呈纺锤形的薄壁细胞显微鉴别特征；e.续断的薄壁细胞显微鉴别特征

2.2 薄层鉴别

2.2.1 独活的薄层鉴别 取本品内容物5 g，加甲醇10 ml，超声处理15 min，静置，取上清液作为供试品溶液[6]。另取独活对照药材0.52 g，同法制成对照药材溶液。另取除去独活按处方和工艺制得的阴性对照样品4.48 g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验（《中国药典》2010版一部附录Ⅵ B），吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（7∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液相同位置无干扰。结果见图2。

2.2.2 续断的薄层鉴别 取本品内容物5 g，加水100 ml，加热回流30 min，滤过，滤液浓缩至10 ml，加在D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为10 cm）上，用水100 ml洗脱，弃去洗脱液，再用30%乙醇100 ml洗脱，弃去洗脱液，再用50%乙醇100 ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇溶液200 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液[7-9]。另取续断对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。另取除去续断按处方和工艺制得的阴性对照样品4.5 g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰乙酸-水（4∶1∶5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。阴性对照溶液无此斑点。结果见图3。

图3 续断薄层图谱（日光下）

1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.续断对照药材；5.缺续断阴性对照

2.2.3 牛膝的薄层鉴别 取本品内容物16.7 g，加70%乙醇120 ml，加热回流3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 ml使溶解，用三氯甲烷20 ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水20 ml洗涤，弃去水洗涤液，正丁醇液经适当浓缩后，加入1 g中性氧化铝拌匀，挥尽溶剂，置中性氧化铝柱（100～200目，4 g，内径为10～15 mm，干法装柱）上，用乙酸乙酯-乙醇（4∶1）的混合溶液40 ml洗脱，弃去洗脱液，继用40 ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液[10-13]。另取牛膝对照药材2 g，加70%乙醇50 ml，同法制成对照药材溶液。另取除去牛膝按处方和工艺制得的阴性对照样品14.7 g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验（《中国药典》2010版一部附录Ⅵ B），吸取上述3种溶液各15 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照溶液相同位置无干扰。结果见图4。

图4 牛膝薄层色谱（紫外254 nm）

1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.牛膝对照药材；5.缺牛膝阴性对照

2.2.4 当归的薄层鉴别 取本品内容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超声处理30 min，过滤，滤液用稀盐酸调pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），合并乙醚层，挥干乙醚，用甲醇1 ml溶解作为供试溶液[6，14-16]。另取当归对照药材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得对照药材溶液。另取除去当归按处方和工艺制得的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，至紫外灯（365 nm）下检视。结果见图5。

图5 当归薄层色谱图（紫外 365 nm）

1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.当归对照药材；5.缺当归阴性对照

3 讨论

3.1 显微鉴别

原质量标准中只收载了杜仲和续断的显微鉴别，为了能更加有效地控制骨刺胶囊的质量，对杜仲和续断的显微特征进行了补充和完善，并增加了牛膝和熟地的显微鉴别项。

3.2 独活、续断、牛膝和当归的薄层鉴别

本鉴别项均为增加项。在对方中全部药材进行了薄层色谱鉴别后，制订了重现性较好且无阴性干扰的独活、续断、牛膝和当归为薄层色谱鉴别内容，列入质量标准。对其他药材杜仲、熟地和威灵仙等都进行了薄层方案考察，但均因本品药味多，成分复杂，互相干扰严重，而未能得到满意结果，故其薄层色谱鉴别内容不列入质量标准。

[参考文献]

[1] 黄传俊，胡丽娅，杨茂文.骨刺胶囊的质量标准研究[J].时珍国医国药， 2006，17（6）：1013.

[2] 胡世林，冯学锋，唐晓军.中国道地药材原色图说[M].济南：山东科学技术出版社，1998：196，211，348.

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[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：67，116，124，154，246，309.

[7] 王晓一，周昕，陈剑.薄层鉴别法定性鉴别腰疼丸中续断、牛膝报告[J].九江学院学报·自然科学版，2006，21（1）：82-83.

[8] 袁玲艳，赵永慧，赵嘉琳，等.续断通络胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（2）：97.

[9] 陈宁，韦英杰，周学敏，等.复方续断胶囊的质量标准研究[J].中国新药杂志，2009，18（23）：2283.

[10] 卢树杰，张纲，甄兰敏.舒筋通络颗粒中牛膝的薄层色谱鉴别[J].中国药业，2010，19（6）：26.

[11] 黄荣增，孟军华，吴娟.根痛平胶囊的质量标准研究[J].中国药师，2010， 18（4）：508.

[12] 金珠，位鸿，李秉钧，等.骨痹灵胶囊质量标准研究[J].中成药，2005，27（5）：529-532.

[13] 杜天信，李洁，杜志谦，等.桃仁膝康丸质量标准研究[J].世界中西医结合杂志，2011，6（6）：513.

[14] 陈岩，谢培山，颜玉贞.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集[M].广州：广东科技出版社，1993：110.

[15] 郭亮，郭剑华，马善治，等.膝舒胶囊质量标准研究[J].实用中医药杂志，2012，28（12）：1070.

[16] 邓小玉，殷婵玉，赵吉平.少林风湿跌打膏质量标准研究[J].湖北中医杂志，2012，34（2）：73.

（收稿日期：2014-04-16 本文编辑：许俊琴）

图4 牛膝薄层色谱（紫外254 nm）

1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.牛膝对照药材；5.缺牛膝阴性对照

2.2.4 当归的薄层鉴别 取本品内容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超声处理30 min，过滤，滤液用稀盐酸调pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），合并乙醚层，挥干乙醚，用甲醇1 ml溶解作为供试溶液[6，14-16]。另取当归对照药材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得对照药材溶液。另取除去当归按处方和工艺制得的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，至紫外灯（365 nm）下检视。结果见图5。

图5 当归薄层色谱图（紫外 365 nm）

1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.当归对照药材；5.缺当归阴性对照

3 讨论

3.1 显微鉴别

原质量标准中只收载了杜仲和续断的显微鉴别，为了能更加有效地控制骨刺胶囊的质量，对杜仲和续断的显微特征进行了补充和完善，并增加了牛膝和熟地的显微鉴别项。

3.2 独活、续断、牛膝和当归的薄层鉴别

本鉴别项均为增加项。在对方中全部药材进行了薄层色谱鉴别后，制订了重现性较好且无阴性干扰的独活、续断、牛膝和当归为薄层色谱鉴别内容，列入质量标准。对其他药材杜仲、熟地和威灵仙等都进行了薄层方案考察，但均因本品药味多，成分复杂，互相干扰严重，而未能得到满意结果，故其薄层色谱鉴别内容不列入质量标准。

[参考文献]

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[5] 张湛睿，史亚军，姜建东，等.骨刺消痛胶囊质量标准研究[J].陕西中医，2009，30（6）：726.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：67，116，124，154，246，309.

[7] 王晓一，周昕，陈剑.薄层鉴别法定性鉴别腰疼丸中续断、牛膝报告[J].九江学院学报·自然科学版，2006，21（1）：82-83.

[8] 袁玲艳，赵永慧，赵嘉琳，等.续断通络胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（2）：97.

[9] 陈宁，韦英杰，周学敏，等.复方续断胶囊的质量标准研究[J].中国新药杂志，2009，18（23）：2283.

[10] 卢树杰，张纲，甄兰敏.舒筋通络颗粒中牛膝的薄层色谱鉴别[J].中国药业，2010，19（6）：26.

[11] 黄荣增，孟军华，吴娟.根痛平胶囊的质量标准研究[J].中国药师，2010， 18（4）：508.

[12] 金珠，位鸿，李秉钧，等.骨痹灵胶囊质量标准研究[J].中成药，2005，27（5）：529-532.

[13] 杜天信，李洁，杜志谦，等.桃仁膝康丸质量标准研究[J].世界中西医结合杂志，2011，6（6）：513.

[14] 陈岩，谢培山，颜玉贞.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集[M].广州：广东科技出版社，1993：110.

[15] 郭亮，郭剑华，马善治，等.膝舒胶囊质量标准研究[J].实用中医药杂志，2012，28（12）：1070.

[16] 邓小玉，殷婵玉，赵吉平.少林风湿跌打膏质量标准研究[J].湖北中医杂志，2012，34（2）：73.

（收稿日期：2014-04-16 本文编辑：许俊琴）

图4 牛膝薄层色谱（紫外254 nm）

1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.牛膝对照药材；5.缺牛膝阴性对照

2.2.4 当归的薄层鉴别 取本品内容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超声处理30 min，过滤，滤液用稀盐酸调pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），合并乙醚层，挥干乙醚，用甲醇1 ml溶解作为供试溶液[6，14-16]。另取当归对照药材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得对照药材溶液。另取除去当归按处方和工艺制得的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，至紫外灯（365 nm）下检视。结果见图5。

图5 当归薄层色谱图（紫外 365 nm）

1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.当归对照药材；5.缺当归阴性对照

3 讨论

3.1 显微鉴别

原质量标准中只收载了杜仲和续断的显微鉴别，为了能更加有效地控制骨刺胶囊的质量，对杜仲和续断的显微特征进行了补充和完善，并增加了牛膝和熟地的显微鉴别项。

3.2 独活、续断、牛膝和当归的薄层鉴别

本鉴别项均为增加项。在对方中全部药材进行了薄层色谱鉴别后，制订了重现性较好且无阴性干扰的独活、续断、牛膝和当归为薄层色谱鉴别内容，列入质量标准。对其他药材杜仲、熟地和威灵仙等都进行了薄层方案考察，但均因本品药味多，成分复杂，互相干扰严重，而未能得到满意结果，故其薄层色谱鉴别内容不列入质量标准。

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[5] 张湛睿，史亚军，姜建东，等.骨刺消痛胶囊质量标准研究[J].陕西中医，2009，30（6）：726.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：67，116，124，154，246，309.

[7] 王晓一，周昕，陈剑.薄层鉴别法定性鉴别腰疼丸中续断、牛膝报告[J].九江学院学报·自然科学版，2006，21（1）：82-83.

[8] 袁玲艳，赵永慧，赵嘉琳，等.续断通络胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（2）：97.

[9] 陈宁，韦英杰，周学敏，等.复方续断胶囊的质量标准研究[J].中国新药杂志，2009，18（23）：2283.

[10] 卢树杰，张纲，甄兰敏.舒筋通络颗粒中牛膝的薄层色谱鉴别[J].中国药业，2010，19（6）：26.

[11] 黄荣增，孟军华，吴娟.根痛平胶囊的质量标准研究[J].中国药师，2010， 18（4）：508.

[12] 金珠，位鸿，李秉钧，等.骨痹灵胶囊质量标准研究[J].中成药，2005，27（5）：529-532.

[13] 杜天信，李洁，杜志谦，等.桃仁膝康丸质量标准研究[J].世界中西医结合杂志，2011，6（6）：513.

[14] 陈岩，谢培山，颜玉贞.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集[M].广州：广东科技出版社，1993：110.

[15] 郭亮，郭剑华，马善治，等.膝舒胶囊质量标准研究[J].实用中医药杂志，2012，28（12）：1070.

[16] 邓小玉，殷婵玉，赵吉平.少林风湿跌打膏质量标准研究[J].湖北中医杂志，2012，34（2）：73.

（收稿日期：2014-04-16 本文编辑：许俊琴）