摘要：本研究对木耳栽培种质资源国审认定的标准菌株19株进行酯酶同工酶的多样性研究，初步明确木耳栽培种质资源的遗传信息，为标准菌株库的建立、评价提供重要的基础数据。

关键词：木耳；种质资源；酯酶同工酶；多样性

中图分类号：S646.6文献标识码：A文章编号：1674-0432（2014）-05-38-1

1实验设计

供试菌株采用液体培养，之后进行样品制备，采用酯酶同工酶电泳技术，进行酶谱多样性分析、相似系数分析和聚类分析，明确供试菌株的遗传多样性，为标准菌株库的建立提供遗传信息。酶谱多样性分析相似系数分析聚类分析明确供试菌株的遗传多样性，

2试验材料

2.1供试菌株

供试菌株19株，由吉林农业大学园艺学院提供，为全国食用菌品种认定委员会认定通过的国审标准菌株，菌株信息见表1。

2.2试验方法

挑取保存的菌丝于液体培养基中，在25℃、100转/分钟条件下振荡培养20天。过滤菌丝，用蒸馏水冲洗干净，用真空泵吸取培养基至菌丝体成饼状，按1∶1的比例加入样品提取液，充分研磨后，至于冷冻离心机中，0℃，12000转/分钟离心15分钟后，即得同工酶提取液。凝胶制备后点样，采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳。取出凝胶片，放入现配的染色液染色。

2.3数据处理

酯酶同工酶电泳数据在NTSYS-pc2.10e软件上，利用SIMQUAL程序计算菌株间遗传相似系数，之后进行聚类分析，绘制树状聚类图。

3结果与分析

3.1酯酶同工酶酶谱的多样性

由实验结果可知，供试菌株酯酶同工酶电泳酶谱清晰可见，类型多样，共检测出243条酶带，17个酶谱类型，其中迁移率不同的酶带35条，其迁移率（Rf）范围为0.129～0.695；多态性酶带32条，多态性酶带比率是91%；各个菌株有11-16条不等；酶带E20（Rf=0.445）、E23（Rf=0.490）、E24（Rf=0.507）是供试菌株共有的稳定酶带，出现频率100%；酶带E11（Rf=0. 357）、E26（Rf=0.543）、E28（Rf=0.571）是菌株中农黄天菊花耳特有酶带；酶带E12（Rf=0.364）、E16（Rf=0.395）为菌株Au8129所特有；菌株浙耳1号特有酶带E18（Rf=0.414）。

3.2酯酶同工酶酶谱的聚类分析

供试菌株在相似系数0.56水平处可以分为四大类群。类群Ⅰ共计8株，包括吉杂1号、黑耳6号、吉AU2号、黑A、黑木耳2号、延特3号、延特5号、丰收2号等。类群Ⅰ菌株共检测出酶带16条，多态性酶带13条，多态性酶带比例41%。在相似系数1.00水平处菌株黑耳6号和吉AU2号、黑A和黑木耳2号聚为一类，其遗传背景相近；类群Ⅱ共计3株，分别是浙耳1号、新科、单片5号。类群Ⅱ菌株共检测出酶带18条，多态性酶带15条，多态性酶带比例47%；类群Ⅲ，共计7株，包括黑793、H10、沪耳3号、Au8129、黑耳4号、黑耳5号和黑木耳1号。类群Ⅲ菌株共检测出酶带26条，多态性酶带23条，多态性酶带比例72%，酶谱多样性尤为丰富；类群Ⅳ即为菌株中农黄天菊花耳，检测出酶带16条，多态性酶带13条，多态性酶带比例41%。

3.3供试菌株间相似系数

供试菌株中任意两个菌株间的相似系数0.296-1.000不等，其平均相似系数为0.594，菌株黑耳6号和吉AU2号、黑A和黑木耳2号的相似系数均为1.000，判定是相同菌株，菌株Au8129和黑A、黑木耳2号的相似系数最小仅为0.296。供试菌株的平均相似系数中菌株Au8129最小为0.396，延特5号的平均相似系数最大为0.677。供试菌株间的相似系数的降序排列中，排次位于前列的菌株是聚类分析中类群Ⅰ的供试菌株，平均相似系数为0.677～0.631不等，说明类群Ⅰ的供试菌株遗传背景更为相近。

4结语

本文通过对供试菌株酯酶同工酶的电泳，共检测出迁移率不同的酶带35条，17个酶谱类型；经聚类分析，可以在相似系数0.56处划分为四大类群，且每一类群均有特征型酶带，结果表明供试菌株酶谱多样性丰富，可以根据酯酶同工酶电泳初步明确供试菌株的遗传背景，为标准菌株库的建立提供遗传信息。

作者简介：李国兴，镇赉县植物保护与植物检疫工作站，农艺师，研究方向：农业技术推广。