房师松，柴燕文，王 昕，吕 星，吴春利，程小雯，张仁利，薛 红，程锦泉

2.香港科技大学生命科学部应用基因组中心，香港 999077

随着达菲大量应用于临床，流感病毒在NA和HA上的耐药性突变株及耐药性突变位点逐渐增多［1］，特别是H275Y是近年来季节性H1N1流感病毒对达菲产生耐药性的主要分子机制［2－3］，流感病毒已在药物选择的压力下出现耐药现象，并呈扩散趋势［4－5］。自2009年6月WHO报道了第1例耐奥司他韦的甲型H1N1流感病例，截止到2010年5月已累计报道了290例对奥司他韦耐药的甲型H1N1流感病例，我国大陆也发现1例对达菲耐药的病例［6－7］。虽然耐药的甲型H1N1流感病毒目前只占很小的比例，但是英国和以色列已经报道了耐奥司他韦的甲型H1N1流感病毒在人与人之间能相互传播［8－9］。因此，目前的研究除了要准确检测甲型H1N1流感病毒之外，还应准确检测流感病毒的耐药位点是否发生突变，从而判断流感病毒是否已对达菲类药物产生耐药性。

本研究主要应用了新型的SNP基因分型技术：单荧光标记延伸的单核苷酸多态性位点检测方法——OLE（One－label extension）［10］，再结合荧光偏振技术，实现对耐药性位点基因型的快速分型，从而建立一种具有临床应用前景的高通量、高敏感性及特异性、操作简便、判读结果直观明确、检测费用低，能快速、准确检测流感病毒耐药位点突变的新方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料 随机选取深圳市2009－2010年流感监测的甲型H1N1流感病例标本，细胞培养和鸡胚培养分离的流感病毒毒株为研究材料，共包括51株新甲型H1N1流感病毒，所有病毒都经实验确认型别和亚型。……