吴守芳 江广予 马明明 丁雪冰 王雪晶

1)河南卢氏县人民医院 卢氏 472200 2)河南三门峡黄河医院 三门峡 452000 3)郑州大学帕金森病及相关运动障碍病病研究所 郑州 450052

突变型TDP-43(A315T)蛋白诱导SH-SY5Y细胞凋亡的机制研究

吴守芳1)江广予2)马明明3)丁雪冰3)王雪晶3)

1)河南卢氏县人民医院 卢氏 472200 2)河南三门峡黄河医院 三门峡 452000 3)郑州大学帕金森病及相关运动障碍病病研究所 郑州 450052

目的 探讨TDP-43(A315T)突变蛋白诱导SH-SY5Y细胞凋亡的机制。方法 采用真核细胞转染技术将Flag-TDP-43(wt)及Flag-TDP-43(A315T)质粒转入SH-SY5Y细胞，通过Western blot检测TDP-43截短型表达及自噬水平的变化；PI/Annexin-V-FITC检测细胞凋亡率；单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin，MDC)染色检测细胞自噬空泡的变化。结果 与转染Flag-TDP-43(wt)组相比，过表达Flag-TDP-43(A315T)细胞截短型片段Flag-TDP-35及Flag-TDP-25表达明显上调，下调细胞内源性Beclin 1水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值降低。与转染Flag-TDP-43(wt)组相比，过表达Flag-TDP-43(A315T)诱导SH-SY5Y细胞自噬性小泡聚集明显减少。与转染Flag- TDP-43(wt)组相比，过表达Flag-TDP-43(A315T)后SH-SY5Y细胞凋亡率增加。结论 TDP-43(A315T)突变蛋白可通过增加其截短型表达及抑制细胞巨自噬水平诱导SH-SY5Y细胞凋亡。

TDP-43(A315T)；SH-SY5Y细胞；自噬；凋亡

肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)和额颞叶变性 (frontotemporal lobar degeneration，FTLD)是两种临床少见的神经退行性疾病，研究证实，二者有共同的病理基础，即神经系统残存神经元及胶质细胞内存在泛素阳性包涵体，其发病与TDP-43基因突变导致神经元退行性改变相关[1]。TDP-43(TAR DNA-binding protein 43)是由 414 个氨基酸构成的一个多功能DNA和RNA结合蛋白，其在RNA转录、选择性剪接及mRNA稳定性调节等过程中发挥功能[2]。家族性ALS病例中，也已鉴定出40多种TDP-43蛋白突变[3]，越来越多的研究证实，TDP-43蛋白与ALS及FTD的发病密切相关，但其表达的蛋白在发病中机制如何至今尚不能确定。……