张 静 徐小隔 龚 哲 赵绍云 何 霞 王天舒 焦淑洁 滕军放 贾延劼

郑州大学第一附属医院神经内科 郑州 450052

·论著·

Let-7b慢病毒载体构建及对大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的影响

张 静 徐小隔 龚 哲 赵绍云 何 霞 王天舒 焦淑洁 滕军放 贾延劼

郑州大学第一附属医院神经内科 郑州 450052

目的 探讨Let-7b过表达和Let-7b抑制慢病毒载体在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化中的作用。方法 构建Let-7b过表达和Let-7b抑制慢病毒载体并感染大鼠MSCs，筛选最适感染复数(MOI)；实验分未感染组、感染组1(感染LV-rno-Let-7b-up)、感染组2(感染LV-rno-Let-7b-inhibition)、阴性对照组(感染空病毒)；采用法舒地尔诱导感染后大鼠MSCs分化为神经元细胞。倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后荧光表达情况；采用免疫细胞化学染色检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经微管结合蛋白(MAP-2)的表达变化；PT-PCR检测MAP-2 mRNA的表达变化；MTT法检测细胞存活率。结果 倒置显微镜下观察大鼠LV-rno-Let-7b-up和LV-rno-Let-7b-inhibition慢病毒载体感染成功，MOI值为10，感染3 d时大鼠LV-rno-Let-7b-up慢病毒感染率最高，细胞存活率较高，感染率可达(92.1±4.3)%；MOI为20，感染5 d时大鼠LV-rno-Let-7b-inhibition慢病毒感染率最高，细胞存活率较高，感染率可达(90.3±4.2)%。法舒地尔可以诱导MSCs向神经细胞分化，感染组1诱导MSCs为神经细胞显著高于阴性对照组和感染组2，NSE、MAP-2表达率明显高于阴性对照组和感染组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 结论 LV-rno-Let-7b-up可更高效感染大鼠 MSCs，感染LV-rno-Let-7b-up后大鼠MSCs经法舒地尔诱导向神经细胞分化比率增加。

Let-7b；骨髓间充质干细胞；神经元

骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cell，MSCs)是骨髓中除造血干细胞外的另一类具有高度可塑性的细胞群体，是一类可以从体内器官组织中分离出的具备在体外培养、诱导和扩增等特性的细胞[1]，在基因治疗、细胞治疗、组织工程等领域具有广泛的临床应用前景[2]。……