李 晋，徐尚福，张晓洁，白国辉，罗 果

(1.遵义医学院 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 基础药理省部共建教育部重点实验室暨药理学教研室，贵州 遵义 563099)

肝纤维化是多种慢性肝病向肝硬化发展的中间病理阶段，肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)的激活是肝纤维化发生的关键环节[1]。现认为在组织、细胞、分子水平上的主要促纤维化发生机制包括创伤愈合反应的慢性活化、氧化应激、上皮-间质相互作用的紊乱[2]。氧化应激本身即可活化HSC，促进肝纤维化形成。CYP2E1是肝脏药物代谢酶系细胞色素P450的重要亚型，与氧化应激(Oxidative Sress, OS)关系密切[3]。因此本研究通过观察小柴胡汤对肝纤维化大鼠肝组织CYP2E1表达的影响，探讨小柴胡汤抗肝纤维化的可能机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料 小柴胡颗粒(四川禾润制药有限公司，批号：110505)；四氯化碳-分析纯(国药集团化学试剂北京有限公司)；RNAiso plus、Power SYBR Green PCR Master Mix、Prime ScriptTMRT reagent Kit及Primer均购自TakaRa公司；兔抗大鼠CYP2E1多克隆抗体(bs-1725R，北京博奥森生物技术有限公司)；免疫组化检测试剂盒(GK500705，基因科技上海有限公司)。

1.2 分组与给药 健康SD雄性大鼠(SPF级，合格证号：SCXK(渝)2007-0005)，体重200±20g，适应性喂养1周后随机分为5组(每组10只)，包括空白对照组(control)，模型组(model)，小柴胡汤低(XCHT(1g/kg))、中(XCHT(2g/kg))、高(XCHT(4g/kg))剂量组(小柴胡颗粒1 g=3.58g原生药)[4]。皮下注射10%四氯化碳5 mL/kg造模，每周2次，共14周[5]，空白对照组以同样方法皮下注射等量生理盐水。第9周开始治疗组按1 mL/100g灌胃给药6周，每天1次(空白对照组和模型组给予等量蒸馏水)。第14周末将全部大鼠隔夜禁食，次日以乙醚麻醉腹主动脉采血处死，迅速切取2块肝组织，一块用10%的甲醛固定后制备石蜡切片，另一块于-80°冰箱保存用于Real-time RT-PCR。……