吴勃岩，王雪，董静，刘文波，孙阳，郭艳莹，王晓军

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

细胞凋亡与肿瘤发生发展的关系密切，是近年来肿瘤研究领域的热点，诱导肿瘤细胞凋亡已成为肿瘤治疗的重要途径。齐墩果酸(Olesnolic Acid，简称OA)是一种天然产物化学成分，广泛存在于女贞子、白花蛇舌草、夏枯草、乌梅、三七、山茱萸、山楂、丁香、连翘等植物中。齐墩果酸具有保肝降酶、抗炎、抗病毒、免疫双向调解、抑瘤、促凋亡等多种药理作用［1－3］。本文研究齐墩果酸对肉瘤S180荷瘤小鼠线粒体凋亡途径中相关蛋白细胞色素C和Caspase－3表达的影响，探讨其抗肿瘤作用机制，为齐墩果酸用于临床治疗肿瘤奠定基础。

1 材料

1.1 实验动物

清洁级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g，6～8周龄，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

1.2 药物、瘤株和试剂

齐墩果酸(Sigma公司);小鼠S180腹水瘤株(购于哈尔滨医科大学附属肿瘤医院);细胞色素C和Caspase－3试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。

2 实验方法

2.1 复制肿瘤动物模型

在无菌的条件下取传代后7天生长良好的S180腹水瘤株，用无菌生理盐水按1∶3稀释，以0.2ml/只接种于小鼠右侧腋下，待其长为实体瘤，阳性率为100%。

2.2 检测肿瘤组织中细胞色素C和Caspase－3蛋白含量

将接种S180肿瘤细胞的小鼠随机分为模型组，齐墩果酸高、中、低剂量组，环磷酰胺组。于接种瘤细胞6h后首次给药，齐墩果酸高、中、低剂量组分别按4.992mg/kg、2.496mg/kg、1.248mg/kg 灌胃给药，环磷酰胺(CY)组40mg/kg腹腔注射，肿瘤模型组以生理盐水0.2ml/只灌胃，连续给药8天，每日1次。断髓处死小鼠，剥离瘤组织，10%甲醛固定，选用免疫组化法常规制片，检测细胞色素C和Caspase－3蛋白含量(按试剂盒说明书步骤操作)。……