谢家楠，郭建军, 金道超

(贵州山地农业病虫害重点实验室，贵州大学昆虫研究所，贵阳 550025)

白背飞虱ISSR-PCR反应体系构建的正交设计优化

谢家楠，郭建军, 金道超*

(贵州山地农业病虫害重点实验室，贵州大学昆虫研究所，贵阳 550025)

白背飞虱是水稻重要害虫之一。研究采用L16(45)正交设计优化试验，构建了白背飞虱ISSR最优反应体系，并对引物退火温度和反应循环次数进行了优化。结果表明：白背飞虱ISSR-PCR最优反应体系为2 μL 10×PCR Buffer(10mmol/L Tris-HCl;50mmol/L KCl),1.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTPs，0.9 μmol/L引物，1UTaqPolymerase和50ng 模板DNA，ddH2O补充至20μL。本研究采用的10条引物的最佳退火温度在51.0～54.0℃间，以引物相应最优退火温度和40次反应循环可获得较好的白背飞虱ISSR-PCR结果。

白背飞虱； 正交设计； ISSR

ISSR(inter-simple sequence repeat)标记是一种基于微卫星基础的分子技术[1]，其用小段重复序列加2～4个随机核苷酸为引物，PCR扩增模板DNA重复序列间基因片段，采用聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分析扩增获得的条带，研究其基因多态性。该技术较SSR技术引物开发简单、通用性好；较RAPD技术信息量大、多态性高；精确度几乎可与RFLP相媲美，具有良好的稳定性和检测方便等特性[2]，已广泛用于地理种群遗传多样性研究[3-5]。在ISSR标记的实际应用中需首先优化PCR反应体系，才能获得可靠的试验结果。

白背飞虱[Sogatellafurcifera(Horváth)]属半翅目(Hemiptera)飞虱科(Delphacidae)[6]，是广布性重要水稻害虫[7]；自20世纪50年代后期水稻种植制度改制以来，白背飞虱为害逐年扩大，特别在近年因其暴发为害造成水稻大量减产甚至绝收的情况屡见不鲜[8]。在此背景下，展开了稻飞虱的广泛研究[9-12]，但对白背飞虱ISSR-PCR体系系统优化研究尚未见报道。……