秦文韬，黄晓庆，孔繁芳，王忠跃，张 昊

(中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193)

葡萄霜霉病菌PCR检测方法的建立与应用

秦文韬，黄晓庆，孔繁芳，王忠跃*，张 昊*

(中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193)

通过对已测序和已报道的葡萄霜霉病菌[Plasmoparaviticola(BerketCurtis) Ber.etde Toni]细胞色素c氧化酶亚型2(cytochrome c oxidase Ⅱ，cox2)的基因序列进行同源性比对分析，设计合成了一对用于P.viticola的检测引物F-Pv/R-Pv。利用该引物对包括P.viticola在内的30种常见植物病原真菌(包括15种Plasmopara属真菌、8种葡萄常见致病菌)的基因组DNA进行了PCR扩增，验证引物F-Pv/R-Pv的特异性，结果表明：该引物特异性强，仅P.viticola基因组DNA作为模板的PCR扩增产物呈现一条600bp左右的特异性条带，其他参照菌株及阴性对照均无任何条带；灵敏度验证结果表明，该检测法可以检测出3.3pg/μL 水平的P.viticola基因组DNA；应用该方法对来自全国不同葡萄产区的不同品种的78份葡萄霜霉病菌进行了检测，结果表明，该检测法适用范围广，且检测准确率达100%。

葡萄霜霉病菌；cox2； 聚合酶链式反应； 检测

葡萄霜霉病是世界和我国葡萄的第一大病害，发生面积逐年扩大，成为优质葡萄生产的重要限制因素，一般年份可减产10%～20%，严重的可达70%～80%，并严重影响第二年产量，是现阶段制约世界和我国葡萄产业的一大瓶颈[1]。葡萄霜霉病菌属鞭毛菌亚门，卵菌纲，霜霉目、霜霉科、单轴霉属的一种专性寄生真菌，该病菌主要侵染植株的幼嫩器官，如嫩叶、嫩梢和幼果。如果防治不及时，霜霉病会导致葡萄植株叶片脱落，枝梢扭曲，对葡萄树势、产量和品质都有很大的影响。……