王念武，王 婷，沈建国，胡方平*

(1.福建农林大学植物保护学院，福州 350002； 2.福建出入境检验检疫局,福州 350001)

实验方法与技术

番茄细菌性叶斑病菌超分支滚环扩增快速检测技术

王念武1,2，王 婷1，沈建国2，胡方平1*

(1.福建农林大学植物保护学院，福州 350002； 2.福建出入境检验检疫局,福州 350001)

根据番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonassyringaepv.tomato,Pst)的一段特异蛋白基因序列，按照锁式探针的设计原理设计探针和扩增引物，优化系列反应条件，建立了特异性的Pst超分支滚环扩增技术。试验结果表明：该检测技术能够从供试的10种不同的病原菌中特异性地检测出番茄细菌性叶斑病菌，DNA检测的最低浓度为500fg/μL，检测灵敏度高于常规PCR。

番茄细菌性叶斑病菌； 超分支滚环扩增； 锁式探针

番茄细菌性叶斑病(bacterial speck of tomato)是番茄上重要的病害之一，病原菌为Pseudomonassyringaepv.tomato(Okabe) Young ，Dye & Wilkie(Pst)。该病害最早于1933年在美国的布雷登顿市被发现，但因为这种病害很容易和其他细菌性病害混淆，致使在其他地方很少被报道，直到1977-1978年在霍姆斯特德地区大暴发之后才被重视[1]。该病菌仅危害番茄，可造成叶片斑点、坏死，导致植株生长不良而减产；在果实上危害形成瑕疵症状，影响番茄的感官品质而导致难以销售[2]。该病害因缺少典型的诊断鉴别症状极易和其他病害的症状混淆，另外，病原菌又可由种子携带，所以对该病害的快速诊断和病原菌的快速检测是植病工作者的研究内容之一。

传统的方法可用于诊断和鉴定P.syringaepv.tomato病原，但费力费时；用非放射性元素标记DNA探针可用于检测番茄植株上的叶斑病菌，但因菌株自身产生毒素，检测结果常受到影响[3]；……