胡加谊， 罗志文， 李向宏， 范鸿雁, 周 朋，章绍延， 张治礼， 刘志昕， 何 凡*

(1.海南省农业科学院热带果树研究所/农业部海口热带果树科学观测实验站， 海口 571100；2.海南省农垦科学院， 海口 570206；3.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室， 海口 571101)

菠萝凋萎相关病毒-1实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用

胡加谊1,2， 罗志文1， 李向宏1， 范鸿雁1, 周 朋3，章绍延3， 张治礼1， 刘志昕3， 何 凡1*

(1.海南省农业科学院热带果树研究所/农业部海口热带果树科学观测实验站， 海口 571100；2.海南省农垦科学院， 海口 570206；3.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室， 海口 571101)

菠萝凋萎相关病毒-1(Pineapplemealybugwiltassociatedvirus-1, PMWaV-1)是田间检出率最高的菠萝凋萎病毒。本研究根据PMWaV-1 CP基因保守序列设计特异性TaqMan探针和引物，建立并优化了PMWaV-1实时荧光定量RT-PCR检测方法。优化后的反应体系制备的标准曲线为y=-3.307×logx+38.18，相关系数r2为0.998。试验结果表明，该方法能特异性地检测PMWaV-1，对PMWaV-2、3和阴性对照均无反应；最低检测限达到40拷贝。重复性试验表明批内和批间变异系数均小于1.98%，是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-1定量检测方法。样品检测结果表明PMWaV-1在菠萝植株老叶、嫩叶和吸芽中的病毒含量呈递减趋势。

菠萝凋萎相关病毒-1; TaqMan探针; 实时荧光定量RT-PCR; 检测

菠萝凋萎病(mealybug wilt of pineapple, MWP)是世界各菠萝主产区最重要的病害之一，对菠萝生产造成严重影响[1-2]。海南、广东、广西等地均有MWP发生[3,8-10]，海南琼海菠萝园发病率高达60%以上， 经济损失高达25%～30%[3-4]。……