李小倩 冯润荷 李 静 唐向东

过氧化氢对游离线粒体Cyt-c释放的影响*

李小倩1冯润荷2△李 静1唐向东1

目的在线粒体水平探讨过氧化氢（H2O2）预处理对游离线粒体细胞色素c（Cyt-c）释放的影响，揭示缺血预适应（IPC）对缺血再灌注（IR）损伤的作用机制。方法分离大鼠肝脏线粒体，制成游离线粒体。将游离线粒体分为5组，（1）为对照（C）组、（2）～（5）组分别加入12.5、25、50和100 µmol/L的Ca2+，刺激游离线粒体10 min，检测游离线粒体Cyt-c，胱氨酸酶激活剂（Smac）的释放量。建立游离线粒体IPC再灌注模型，将游离线粒体分为7组，C组、IR组、加H2O2组共7组，对加H2O2组分别加入2 µL H2O2，终浓度分别为1、2、5、20和100 µmol/L；在H2O2处理后，再用100µmol/L Ca2+对IR组、加H2O2组模拟再灌注，检测Cyt-c的释放量，再对IR组和H2O2终浓度为1和2µmol/L组检测心磷脂活性的变化。结果与C组比较，Ca2+浓度25、50和100µmol/L组Cyt-c、Smac的释放量显著增高（P＜0.05）。与IR组比较，H2O2浓度1、2µmol/L组Cyt-c的释放量明显减少（P＜0.05）。Cyt-c释放减少时可改变心磷脂的活性。结论低浓度H2O2预处理通过使Cyt-c与心磷脂结合得更加紧密，而使线粒体在高Ca2+（100µmol/L）刺激后Cyt-c释放量减少，阻滞了凋亡途径的发生，是IPC对缺血再灌注损伤发挥效应的关键因素。

过氧化氢；细胞色素c；再灌注损伤；钙超载；线粒体通透性转换孔

缺血预适应（IPC）是广泛存在的内源性保护机制，存在于多种器官系统，如心脏、脑、肝脏和肾脏。虽然IPC现象已达到共识，但其确切机制尚不完全清楚，因而一直以来是缺血再灌注（IR）研究领域的一个热点问题。细胞色素c（Cyt-c）[1]、胱氨酸酶激活剂（Smac）[2]等线粒体内容物释放入胞浆而导致细胞凋亡是目前广泛接受的IR损伤机制，而IPC对IR损伤的保护机制是否与Cyt-c、Smac的释放有关尚不清楚。……