山羊雪旺氏细胞培养方法和技巧

2014-08-07夏许可

中国骨科临床与基础研究杂志 2014年3期

关键词：方法

夏许可，章莹

雪旺氏细胞作为外周神经的胶质细胞，主要参与髓鞘的构成，并可分泌多种神经营养因子，对外周神经系统生长、发育及神经损伤后的修复具有重要作用[1-2]。原代培养是获取雪旺氏细胞的重要手段[3]，本文介绍初生山羊坐骨神经体外分离、培养雪旺氏细胞（图1）的常用方法和技巧。

1 取材与保存

初生山羊体积较大，坐骨神经较鼠类更为粗大，易于辨认。麻醉后消毒，沿髋关节-腓骨小头连线切开皮肤并分离皮下肌层，即可见坐骨神经及胫神经、腓总神经两大分支。游离并切取长约4 cm的坐骨神经束，即完成取材。山羊雪旺氏细胞活性明显低于鼠类，且坐骨神经束粗大，对缺氧环境耐受性差，取材后神经束保存时间与接种后雪旺氏细胞成活率、产量关系密切，因此需要尽快行后期处理。若暂时不具备后期处理条件，宜将神经束去除束膜后尽量剪碎并置于4℃预冷的DMEM-F12培养液中，于5 h内完成接种。若将整条神经束置于预冷培养液中保存，则后期接种成功率较低。取材过程中应注意无菌，后期可应用无菌PBS缓冲液多次冲洗神经束以避免污染。