张 涛，武肖娜，尹庆水，夏 虹，黄华扬，张 余，李 梅，蓝国波

镁合金是新兴可降解金属材料，具有良好的降解性及生物相容性，近年来受到材料学界及医学界的广泛关注。但是作为一种骨科植入材料，镁合金对骨再生的关键细胞——骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）的成骨分化过程是否存在影响，目前尚不明确。本研究采用镁合金浸提液培养BMSCs并进行诱导分化，研究其对BMSCs增殖活性及成骨分化性能的初步影响。

1 材料与方法

1.1 主要材料和试剂

DMEM低糖培养基、胎牛血清、2.5 g/L胰酶、PBS缓冲液（美国，Hyclone公司），CCK试剂盒（日本，同仁公司），DMSO（美国，Sigma 公司），Percoll淋巴细胞分离液（密度1.073 g/mL，美国，Gibico公司）。成骨诱导剂：1×10-8mol/L地塞米松、10 mmol/L β-甘油磷酸钠、0.2 mmo1/L L-抗坏血酸（美国，Sigma公司）。PrimeScriptRT reagent Kit Perfect Real Time（逆转录试剂盒）、SYBR Green Premix Ex Taq（荧光定量PCR试剂盒）、DNA上样缓冲液、Trizol裂解液（日本，Takara公司）。

超纯水机（美国，Aquapro公司）、酶联免疫检测仪（美国，Thermo公司）、4000型台式低速离心机（日本，KUBOTA公司）、CO2细胞培养箱（美国，Froma Scientific公司）、PCR仪（日本，TAKARA公司）、DYY-6C型电泳仪（北京六一仪器厂）、LightCycler 480荧光定量PCR仪（德国，Roche公司）、流式细胞仪（美国，BD公司）。

1.2 人BMSCs的分离培养及鉴定

常规无菌条件下从6名捐献骨髓健康志愿者髂后上嵴穿刺抽取骨髓5 mL，再连接已肝素化处理的10 mL注射器针筒，迅速转移至含5 mL Percoll的离心管，采用密度梯度离心法，将界面处一白色薄层（细胞层）吸出，转移至另一离心管中，PBS液洗涤2次，弃去上清液后加入DMEM低糖培养液，轻吹打分散，制成细胞悬液。加入含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液2 mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养。取第3代细胞用于后续实验。

收集培养细胞，取1×104个细胞用PBS液调整至100 μL，经多聚甲醛固定后用流式细胞仪检测CD34、CD45、CD44、CD73、CD90和CD105的表达情况[1]。……