齐育平， 周月婷， 马泽萍， 陈丹凤， 蒋冬花

(浙江师范大学 化学与生命科学学院,浙江 金华 321004)

羧肽酶(carboxypeptidases，CPs)是一类肽链外切酶，能专一性地从肽链的C端逐个降解、释放游离氨基酸，在人类、动物、植物的不同组织器官中发挥着重要的生理功能[1].丝氨酸羧肽酶(serine carboxypeptidase，SCP)又称酸性羧肽酶，是一个庞大的水解酶家族，亚基相对分子质量为40 000～75 000，广泛存在于真菌[2-3]、高等植物[4]和动物组织[5]中，在酸性环境下具有末端蛋白水解酶、酯酶和脱酰胺酶的活性，可同时参与多肽和蛋白质的加工、修饰与降解[6].

丝氨酸羧肽酶在植物生长发育过程中参与多肽和蛋白质的加工、修饰与降解等多个重要环节，并且在许多生化途径,包括次生代谢产物的生物合成、催化酰基转移、除草剂共轭和种子萌发等相关蛋白质降解中起重要作用[7].动物来源的羧肽酶主要存在于猪、牛等的胰脏中，如羧肽酶A/B(carboxypeptidase A/B)，其数量非常有限,价格昂贵,导致其应用受到限制；微生物来源的羧肽酶存在于酵母、曲霉等真菌的液泡中，具有广阔的应用前景.因此，借助基因工程策略、采用微生物为宿主大量生产重组羧肽酶，有望克服羧肽酶生产过程中遇到的动植物原料来源有限等限制，进一步降低生产成本、提高产品质量、深化酶学性质研究、扩展应用范围.

本文采用CODEHOP(Consensus-Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primers)[8]在线软件程序化设计简并引物[9-12]，通过逆转录-聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)的方法克隆了红曲菌的丝氨酸羧肽酶基因片段，为后续的研究打下基础.

1 材料和方……

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