覃永华，徐 鑫，王春台

(中南民族大学 生命科学学院 武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室，武汉 430074 )

流式细胞术(FCM)是应用流式细胞仪对处于液流中的各种荧光标记的微粒进行多参数快速准确定性、定量测定的方法，它可直接获取细胞核DNA含量，间接获取细胞的倍性[1-4].生物体的单倍体基因组所含DNA总量 (简称C值)是研究种群进化、物种分类、亲缘关系和生态学的有用分析工具和证据[5]，可通过测定C值来鉴定杂交物种[6].由于植物在生长发育和抵抗外界不良环境的过程中，会发生基因组拷贝数增加[7](多倍性)和基因组扩增[8](核内再复制)，故倍性鉴定可用于评估和分析组织细胞在不同生长环境下的细胞分裂活动.

目前，流式细胞术已广泛应用于植物和动物细胞核DNA含量和倍性的测定，但其在水稻中的应用仍不成熟，由于解离液与水稻材料不匹配使解离效果不好、碎片多、大细胞易破碎，准确性差.尽管已有解离液LB01和Otto成功提取水稻单一组织细胞核的实验报道[9,10]，但由于水稻不同部位组织结构存在显著差异，往往需要用不同解离液解离才能获得良好效果，因为水稻叶片表面有较厚的角质层，纤维含量较高，细胞内次生代谢物多，细胞核的悬液制备较困难[11].本文以3种其他物种中成功报道的分离缓冲液为参考，制备了水稻的细胞核悬液，通过比较以筛选出适用于水稻不同组织细胞核流式细胞术分析的最佳缓冲液，改……