熊海容, 陈 丰，王亚伟, 张 巍

(中南民族大学 生命科学学院，武汉 430074)

木聚糖是生物界中含量最高的半纤维素物质，约占细胞干重的35%.木聚糖内切酶(Endoxylanases, EC 3.2.1.8)特异水解木聚糖中β-1,4糖苷键，是一种重要的工业酶，在食品、饲料、纺织、造纸等行业有重要应用[1-3].在饲料中添加木聚糖酶能很好地消除木聚糖的抗营养作用[4,5].木聚糖酶在工业上的应用受到高温、极端pH下低活性低稳定性的限制，故获得具有良好酶特性，适于工业生产用木聚糖酶成为研究热点.

嗜热真菌(Thermomyceslanuginosus)能产生耐热的酶，尤其是糖苷水解酶11家族的木聚糖酶.嗜热真菌T.lanuginosusDSM 10635分离自捷克土壤，产生的木聚糖酶最适温度为70℃，最适pH值为6.5，分子量为21.30 kDa[1].Yawei Wang等[2, 6]将其表达于大肠杆菌系统，并进行了双硫键突变，获得耐热木聚糖酶突变体DSB，最适反应条件为75℃，pH 6.5.

耐热木聚糖酶粗酶液经硫酸铵沉淀后依次经过疏水层析(HIC)和离子交换层析(DEAE Sepharose FF)得到纯化蛋白[1].因蛋白质组学和结构基因组学研究需要大量的高纯蛋白，通过组氨酸标签标记，固定化金属亲和层析可达到理想的纯化效果[7].组氨酸标签只有6个氨基酸，在蛋白质外侧形成不规则卷曲，但与金属离子络合效果理想，在蛋白纯化、固定化酶等领域应用广泛.组氨酸标签对蛋白质几乎不产生影响，只需一步纯化操作，且纯化后可不用去除标签[8, 9]，相比于两步法纯化操作简便纯化效果提高显著.但有相关文献报道添加组氨酸标签可能对蛋白质性质产生影响[10,11].故构建组氨酸标签……