柳畅先，朱苗苗，王 艺

(中南民族大学 化学与材料科学学院，武汉 430074)

铜是人体内的微量元素之一，但过量摄入会产生危害，铜对水生生物有较大影响.铜的毒性与其形态有关，游离Cu2+的毒性大于络合铜，故Cu2+含量是食品试样和水质监测的重要指标.近30年来酶反应动力学和酶催化作用的应用研究很活跃[1-3]，酶法可测定在酶促反应中作为底物、辅酶、激活剂和抑制剂而存在的物质.如Chen等[4]研究了抑制剂对血管紧张素转换酶的影响，用可见分光光度法和液相色谱法测定抑制剂并比较了这两种方法；Li等[5]将醇脱氢酶固定在毛细管中，用荧光法考察辅酶的变化以测定酒精含量，检测限1.1 g/L，变异系数为1.9%；Cheng等[6]用修饰酶电极检测废水中的葡萄糖，仅用不到5s的响应时间，有良好的灵敏度和准确性.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

分光光度计(721型，上海第三分析仪器厂)，精密pH计(PHS-3C型，上海雷磁仪器厂)，分析天平(FA-2004型，上海精科天平厂)，磁力搅拌器(78-1型，金壇市科兴仪器厂).

铜(Ⅱ)标准溶液(10.0 mmol/L)：称取0.125 g CuSO4·5H2O于烧杯中，加水溶解后定容至50 mL.尿素标准溶液(1.50 mol/L)，脲酶(0.8 U/L)，磷酸盐缓冲溶液(0.25 mol/L, pH=6.8).纳氏试剂[7]：称取8 g氢氧化钠溶于25 mL蒸馏水，冷却到室温；另称取5 g碘化汞和3.5 g碘化钾溶于15 mL水；将该溶液缓缓注入上述溶液中，加水至50 mL，搅拌，密塞保存.

1.2 实验方法

于Ep管中加入200 μL 0.25 mol/L 磷酸盐缓冲液(pH=6.8)，200 μL 1.50 mol/L尿素标准溶液，一定量的铜(Ⅱ)标准溶液，40 μL 0.8 U/L脲酶液后混匀，反应2 min，加入100 μL 3 mol/L硫酸溶液后混匀，移至10 mL比色管，用水稀释至刻度，加入1 mL纳氏试剂，测定425 nm处吸光度变化值(尿素水解……