王 献, 王 玲

(中南民族大学 化学与材料科学学院, 武汉 430074)

黏着斑激酶(FAK)是一种细胞质酪氨酸蛋白激酶，在正常细胞和癌细胞中均发挥着关键的调控作用，与细胞的黏附、伸展、迁移、增殖和凋亡等行为密切相关[1].FAK的抑制剂分子能够有效抑制FAK活性，对肿瘤细胞增殖和迁移有明显的抑制效果[2].PF573228是一种有效的、高选择性的FAK蛋白抑制剂，它是ATP与FAK蛋白特异性结合的竞争性抑制剂[3].本文采用高效液相色谱和四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-QTOF-MS/MS)技术[4]，建立了一种简单、快捷、高效的方法，分离检测了PF573228与肝微粒体体外代谢物，通过二级质谱MS/MS鉴定了PF573228的代谢产物的结构并推测了其代谢裂解途径.

1 实验部分

1.1 仪器及试剂

高效液相色谱仪(Agilent 1200，美国)，四极杆飞行时间质谱仪(Agilent 6520 Q-TOF MS，美国)，超纯水机(Molelement 1815a 摩尔元素型,上海摩勒科学仪器有限公司)，高速冷冻离心机(GL-20M, 上海卢湘仪离心机仪器有限公司)，色谱柱(ZORBAX Eclipse XDB-C18, 美国Agilent)，高精度数控摇床(SH2-03, 上海堪鑫仪器设备有限公司),水浴氮吹仪(CM-12, 北京成萌伟业科技有限公司),色谱柱(ZORBAX Eclipse XDB-C18, 美国Agilent).

SD雌大鼠肝微粒体(20 mg/mL, 广州诺嘉生物科技有限公司)，超纯水(18.25 MΩ)，PF573228(纯度>98%)，6-磷酸葡萄糖(纯度≥98%)，6-磷酸葡萄糖脱氢酶(200～400 U/mg)，NADP(纯度≥98%)，磷酸钾缓冲盐(纯度 ≥98%, Sigma-Aldrich公司)，甲醇、乙腈(色谱纯, 美国Waltman)，氯化镁(分析纯)，乙酸乙酯(色谱纯, 天津科密欧化学试剂有限公司).

1.2 PF573228在大鼠肝微粒体系中的代谢反应

PF573228在大鼠肝微粒体系中的代谢反应孵育方法参照文献[5～8]进行了优化，PF573228用DMSO溶解后用超纯水稀释，用200 mL超纯水溶解磷酸钾缓冲盐药片，完全溶解……