吴云华，邓 欢

(中南民族大学 生命科学学院， 武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室， 武汉 430074)

一氧化氮(NO)是一类可扩散的脂溶性小分子物质，广泛存在于生物体内，易于在细胞内和细胞间扩散[1].NO在植物体内可自身合成，或通过酶促和非酶促反应进行[2].它作为植物体中的信使分子对植物的光形态建成[3]、呼吸作用和根的生长发育[4]起重要的作用，同时对植物进行各种生物胁迫[5](如病虫害)和非生物胁迫[6](如干旱、盐胁迫、低温及重金属)的信息传递中也发挥了重要作用.但目前关于NO在各种生理条件下对水稻幼苗影响的研究较少，尖镰胞菌CYP55A1是一类具有NO还原作用的酶系，故也被称为一氧化氮还原酶细胞色素P450(CYP450)[7]，本实验选取cyp55a1基因作为研究对象，对水稻日本晴进行遗传转化得到阳性转基因植株，为研究该基因功能和NO对水稻的生理作用提供实验材料.

1 材料和方法

1.1 材料

Cyp55a1基因为本实验由尖镰胞菌中克隆得到，表达载体pCAMBIA1302、水稻日本晴的种子，大肠杆菌DH5α，农杆菌EHA105宿主菌株均由中南民族大学武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室提供.

限制性内切酶、pyrobest DNA聚合酶、DNA Marker、T4连接酶(TAKARA公司)，DNA凝胶回收试剂盒(Axygen公司)，酵母粉、胰蛋白胨、总RNA提取试剂Trizol、羧苄(invitrogen公司)，反转录试剂盒(ReverTra Ace-α-TM, 日本TOYOBO公司)，琼脂糖(FMC公司)，其他试剂均为国产试剂分析纯.引物由南京金斯瑞公司合成.

1.2 pCAMBIA1302-cyp55a1植物表达载体的构建

用SDS碱裂解法提取pCAMBIA1302空载体质粒和用Trizol试剂提取尖镰胞菌的……