李兴天，李小战，马红，许辉，李淑，李遇梅

（江苏大学附属医院皮肤科，江苏镇江212001）

低温冻存对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响

李兴天，李小战，马红，许辉，李淑，李遇梅

（江苏大学附属医院皮肤科，江苏镇江212001）

目的：比较人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells，hADSCs）冻存前和复苏后的生物学特性，为今后建立低温干细胞库提供实验支持。方法：采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法从腹部大网膜脂肪组织中分离hADSCs，体外培养扩增，将处于均一稳定生长状态的第3代hADSCs置于液氮中分别冻存1、3和6个月，复苏后台盼蓝染色检测细胞存活率，采用MTT法绘制细胞生长曲线，流式细胞术检测细胞表面抗原，成脂成骨诱导后鉴定多向分化能力，RT-PCR检测成脂特异性基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2（peroxisome proliferator-activated receptorγ-2，PPARγ-2）和成骨特异性基因骨钙素（osteocalcin，OC）的表达情况。结果：随冻存时间的延长细胞存活率略有下降，但差异无统计学意义（P＞0.05）。MTT结果显示冻存前后细胞增殖能力均很强。流式细胞检测结果显示冻存前后细胞均高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD166，低表达CD45和HLA-DR。冻存前后hADSCs均具有向脂肪细胞和骨细胞分化潜能，且RT-PCR结果显示，PPARγ-2和骨钙素mRNA的表达冻存前后差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：经液氮冻存后的hADSCs具有高存活率，生物学特性保持稳定且仍具有多向分化潜能。

人脂肪间充质干细胞；冻存；生物学特性；干细胞库

脂肪间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells，ADSCs）是来源于脂肪组织的间充质干细胞，由于取材方便、对机体损伤小且易于体外培养，已在再生医学研究中受到广泛关注。近期有研究显示，hADSCs免疫原性低，不表达HLAⅡ类抗原且能调节T淋巴细胞的活性［1］，可以用于移植物抗宿主反应或自身免疫性疾病的治疗。……