刘忠德等

摘要：采用索氏提取法对臭椿树皮进行分离、提取及浓缩，获得臭椿提取物，采用不同浓度的提取液处理杂草藜的种子，测定其萌发率、幼根长度、幼芽长度、鲜重，以及藜叶绿素含量、丙二醛（MDA）含量、过氧化物酶（POD）活性。结果表明，臭椿提取物能够抑制杂草藜种子萌发率，影响幼苗生长，降低幼苗鲜重叶绿素含量，增加MDA含量和POD活性。

关键词：臭椿提取物；萌发率；叶绿素；丙二醛（MDA）；过氧化物酶（POD）

中图分类号： S451.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）03-0088-03

臭椿（Ailanthus altissima）在我国分布广泛，生长速度快，在臭椿树周围，很少生长其他杂草，臭椿是否产生某些化学物质对杂草生长造成影响值得探讨。Heisey进行了臭椿提取物对美国当地水芹的化感作用等研究[1-2]。我国在臭椿提取物对昆虫的作用方面，也有少量报道，主要是臭椿提取物对光肩星天牛取食、产卵的驱避作用[3-4]；对植物的作用方面，主要是臭椿提取物对播娘蒿的抑制作用[5]，对刺槐种子发芽的影响[6]，对油菜种子萌发和核酸含量的影响[7]，但在臭椿提取物除草机理方面研究尚未见报道。本试验通过研究臭椿提取物对杂草藜生长、叶绿素含量、丙二醛含量（MDA）、过氧化物酶（POD）活性的影响，以期明确臭椿提取物抑制杂草生长的作用机理。

1 材料与方法

1.1 臭椿提取物的制备

将臭椿树皮烘干后进行粉碎，过20网筛后准确称取干粉10 g，滤纸包好装入索氏提取器，无水乙醇回流提取6 h，然后将提取液在旋转蒸发器内减压浓缩至稠膏状，最后将膏状物用乙醇定容至50 mL，装入磨口棕色广口瓶内密封，置于4 ℃冰箱中备用。

1.2 臭椿提取物对杂草藜种子生长的影响

试验设6个处理，分别为臭椿提取物原液，稀释2、5、10、15倍，清水对照（CK），每处理重复3次。分别用不同浓度梯度提取液处理培养皿里的圆形滤纸片，待滤纸干后继续滴加各浓度溶液，每个培养皿中总共滴加10 mL不同浓度梯度的提取液，待滤纸上的无水乙醇挥发完全后，在培养皿中分别放入30粒大小一致、颗粒饱满、各部分生理结构完整健康的藜种子，将培养皿贴好标签后放入25 ℃恒温光照培养箱中培养7 d。每天记录培养皿中种子发芽数量、计算发芽率，测定各个培养皿中种子根长、芽长，7 d后称量各培养皿中种子鲜重，计算抑制率。

1.3 臭椿提取物对杂草藜生理活性的影响

1.3.1 叶绿素a、b含量测定[8] （1）色素的提取：分别取不同浓度处理的藜叶片，剪成碎块，称取0.1 g放入研钵中加纯丙酮2 mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，将匀浆转入离心管，并用2 mL 80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后沉淀。（2）光密度测定：取上述色素提取液1 mL，加80%丙酮4 mL，稀释后转入比色杯中，以80%丙酮为对照，分别测定D663 nm、D645 nm。（3）计算：计算色素提取液中叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度。根据稀释倍数分别计算叶片中色素的含量（mg/L）：

叶绿素a含量=12.7D663 nm-2.69D645 nm；

叶绿素b含量=22.9D645 nm-4.68D663 nm；

叶绿素a+b含量=8.02D663 nm+20.21D645 nm。

1.3.2 MDA含量的测定[8] （1）MDA的提取：分别取各浓度梯度提取物处理的藜叶片0.1 g，剪碎，加入10%三氯乙酸（TCA）2 mL和少量石英砂，研磨；进一步加入 2 mL TCA充分研磨，匀浆液以4 000 g离心10 min，上清液即为样品提取液。（2）显色反应及测定：吸取2 mL提取液，加入 2 mL 0.6%TBA液，混匀，在试管上加盖塞，置于沸水浴中沸煮15 min，迅速冷却，离心。取上清液测定532 nm和450 mn下的吸光度。对照管以2 mL水代替提取液。（3）计算：MDA-TBA反应产物的最大吸收峰在532 nm，TBA-可溶性糖（以蔗糖为例）的反应产物的最大吸收峰在450 nm，吸收曲线彼此又有重叠。根据Lambert-Beer定律，按以下公式即可计算样品提取液中MDA的含量（C）。

C（mmol/L）=6.45D532 nm-0.56D450 nm

1.3.3 POD活性的测定[8] （1）粗酶液的提取：称取各浓度梯度提取物处理的藜叶片各0.1 g，加4 mL 20 mmol/L KH2PO4于研钵中研磨成匀浆，4 000 r/min 离心15 min，收集上清液保存在冷处。（2）酶活性的测定：取光径1 cm比色杯2只，1只中加入反应混合液 3 mL，KH2PO4 1 mL，作为校零对照，另1只中加入反应混合液 3 mL，上述酶液1 mL，立即开启秒表计时，于分光光度计 470 nm 波长下测定吸光度，1 min读数1次。以1 min D变化值D470 nm/min表示酶活性的大小。

POD[U/（g·min）]= ΔD470 nm×VT/（m×VS×0.01×t）

式中：ΔD470 nm为反应时间内D变化值。VT为提取酶液总体积（mL）；m为植物鲜重（g）；VS为测定时取用酶液体积（mL）；t为反应时间（min）。

2 结果与分析

2.1 臭椿提取物对藜种子生长的影响

2.1.1 臭椿提取物对藜种子萌发率的影响 由表1可以看出，藜种子在培养1 d时不萌发，2 d时稀释5、10、15倍3个处理种子开始萌发，萌发率分别为1.1%、8.9%、22.2%，对照为33.3%；3 d时稀释2倍处理种子开始萌发，4个稀释液处理藜种子萌发率分布为2.2%、144%、41.1%、42.2%，对照为46.7%；4 d时4个稀释液处理藜种子萌发率分别为33%、15.6%、52.2%、533%，对照为70.0%。7 d时原液处理始终没有萌发，稀释2、5倍处理萌发率均较低，分别为55%、17.8%；稀释10、 15倍处理的萌发率相对较高，分别为63.3%、62.2%；对照最终萌发率达到70%。结果表明，臭椿提取物对藜种子的萌发有明显的抑制作用，随着稀释倍数的增加抑制作用降低。endprint

3 小结

臭椿提取物能够抑制藜种子的萌发率、根长、芽长、鲜重；显著降低叶绿素的含量，提高丙二醛含量，增加过氧化物酶的活性。

臭椿提取物对藜种子的萌发和生长有明显的抑制作用，随着稀释倍数的增加抑制强度降低，表现出一定的除草活性，这种抑制作用并不能杀死藜的完全种子，但能延缓种子的萌发时间，导致藜生长不良。

本研究测定了臭椿提取物对杂草藜叶绿素、丙二醛含量、过氧化物酶活性的影响，对常见植物保护酶如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等活性的影响，还有待于进一步研究。

参考文献：

[1]Heisey R M. Herbicidal effects under field conditions of Ailanthus altissima bark extract，which contains ailanthone[J]. Plant & Soil，2003，256（1）：85-99.

[2]Heisey R M. Identifiantion of an allelopathic compound from Ailanthus altissima and characterization of its herbicidal activity[J]. Amerrican journal of Botany，1996，83（2）：192-200.

[3]曹 兵，李治中. 臭椿提取物对光肩星天牛的驱避作用[J]. 南京林业大学学报 2004（1）：47-49.

[4]曹 兵，宋丽华，徐锡增.臭椿内含物对光肩星天牛取食、产卵的抑制作用[J]. 南京林业大学学报，2004（9）：15-18.

[5]刘忠德，刘淑娟.臭椿提取物对油菜生长抑制作用和核酸含量的研究[J]. 江苏农业科学，2009（4）：95-96.

[6]刘忠德，孙 冬，杨勤民. 臭椿提取物对播娘蒿生长抑制作用的研究[J]. 中国植保导刊，2009（5）：43-44.

[7]曹 兵，宋丽华，张婷婷. 臭椿根区土壤水浸提液对刺槐种子发芽的影响[J]. 南京林业大学学报，2009，33（3）：51-58。

[8]张志良，瞿伟菁. 植物生理学实验指导[M]. 3版. 北京：高等教育出版社，2003：151-152.endprint

3 小结

臭椿提取物能够抑制藜种子的萌发率、根长、芽长、鲜重；显著降低叶绿素的含量，提高丙二醛含量，增加过氧化物酶的活性。

臭椿提取物对藜种子的萌发和生长有明显的抑制作用，随着稀释倍数的增加抑制强度降低，表现出一定的除草活性，这种抑制作用并不能杀死藜的完全种子，但能延缓种子的萌发时间，导致藜生长不良。

本研究测定了臭椿提取物对杂草藜叶绿素、丙二醛含量、过氧化物酶活性的影响，对常见植物保护酶如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等活性的影响，还有待于进一步研究。

参考文献：

[1]Heisey R M. Herbicidal effects under field conditions of Ailanthus altissima bark extract，which contains ailanthone[J]. Plant & Soil，2003，256（1）：85-99.

[2]Heisey R M. Identifiantion of an allelopathic compound from Ailanthus altissima and characterization of its herbicidal activity[J]. Amerrican journal of Botany，1996，83（2）：192-200.

[3]曹 兵，李治中. 臭椿提取物对光肩星天牛的驱避作用[J]. 南京林业大学学报 2004（1）：47-49.

[4]曹 兵，宋丽华，徐锡增.臭椿内含物对光肩星天牛取食、产卵的抑制作用[J]. 南京林业大学学报，2004（9）：15-18.

[5]刘忠德，刘淑娟.臭椿提取物对油菜生长抑制作用和核酸含量的研究[J]. 江苏农业科学，2009（4）：95-96.

[6]刘忠德，孙 冬，杨勤民. 臭椿提取物对播娘蒿生长抑制作用的研究[J]. 中国植保导刊，2009（5）：43-44.

[7]曹 兵，宋丽华，张婷婷. 臭椿根区土壤水浸提液对刺槐种子发芽的影响[J]. 南京林业大学学报，2009，33（3）：51-58。

[8]张志良，瞿伟菁. 植物生理学实验指导[M]. 3版. 北京：高等教育出版社，2003：151-152.endprint

3 小结

臭椿提取物能够抑制藜种子的萌发率、根长、芽长、鲜重；显著降低叶绿素的含量，提高丙二醛含量，增加过氧化物酶的活性。

臭椿提取物对藜种子的萌发和生长有明显的抑制作用，随着稀释倍数的增加抑制强度降低，表现出一定的除草活性，这种抑制作用并不能杀死藜的完全种子，但能延缓种子的萌发时间，导致藜生长不良。

本研究测定了臭椿提取物对杂草藜叶绿素、丙二醛含量、过氧化物酶活性的影响，对常见植物保护酶如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等活性的影响，还有待于进一步研究。

参考文献：

[1]Heisey R M. Herbicidal effects under field conditions of Ailanthus altissima bark extract，which contains ailanthone[J]. Plant & Soil，2003，256（1）：85-99.

[2]Heisey R M. Identifiantion of an allelopathic compound from Ailanthus altissima and characterization of its herbicidal activity[J]. Amerrican journal of Botany，1996，83（2）：192-200.

[3]曹 兵，李治中. 臭椿提取物对光肩星天牛的驱避作用[J]. 南京林业大学学报 2004（1）：47-49.

[4]曹 兵，宋丽华，徐锡增.臭椿内含物对光肩星天牛取食、产卵的抑制作用[J]. 南京林业大学学报，2004（9）：15-18.

[5]刘忠德，刘淑娟.臭椿提取物对油菜生长抑制作用和核酸含量的研究[J]. 江苏农业科学，2009（4）：95-96.

[6]刘忠德，孙 冬，杨勤民. 臭椿提取物对播娘蒿生长抑制作用的研究[J]. 中国植保导刊，2009（5）：43-44.

[7]曹 兵，宋丽华，张婷婷. 臭椿根区土壤水浸提液对刺槐种子发芽的影响[J]. 南京林业大学学报，2009，33（3）：51-58。

[8]张志良，瞿伟菁. 植物生理学实验指导[M]. 3版. 北京：高等教育出版社，2003：151-152.endprint