新疆传统发酵驼乳中分离出的一株乳酸菌的分子生物学鉴定
2014-07-13拉提帕艾尔肯新华那比
拉提帕·艾尔肯, 唐 雪, 新华·那比
(1新疆医科大学基础医学院药理学教研室, 乌鲁木齐 830011; 2中国农业科学院农业资源与农业区划研究所,中国农业微生物菌种保藏管理中心, 北京 100081)
驼乳作为营养性食品,在世界上许多国家被推崇,它富含大量的诸如溶菌酶、乳铁蛋白和免疫球蛋白等抗微生物因子,可强化人体的免疫系统。发酵驼乳中含有较高含量的蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸和微量元素,而且蕴涵着大量的微生物,其中最主要的是益生菌为乳酸菌[1]。驼乳和发酵驼乳都具有较高的营养和食用价值。新疆传统发酵驼乳的原料是新鲜驼乳,是具有浓厚民族特色的、利用新疆传统发酵技术制成的一种营养价值较高的保健饮料。民间用于辅助治疗胃肠道溃疡、结核、糖尿病患者[2]。本实验采用分子生物学鉴定方法,利用乳酸菌的遗传物质采用DNA 提取、PCR 扩增、产物测序和数据分析对分离出的一株乳酸菌进行系统发育分析并对其进行分类和鉴定。
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂
发酵驼乳10号乳酸菌菌株从新疆阿勒泰哈萨克族牧民发酵驼乳中分离筛选得到。 细菌DNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司],PCR 反应体系(Fermentas 公司),引物[英潍捷基(上海)贸易有限公司]合成。16S rDNA 测序选用通用引物27F (5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′),rpoA引物选择rpoA-21F(5′-ATGATYGARTTTGAAAAAACC-3′)和rpoA-22R(5′-ACYTTVATCATNTCWGVYTC-3′),pheS引物选择pheS-21F(5′-CAYCCNGCHCGYGAYATGC-3′)和pheS-23R(5′-GGRTGTACCATVCCNGCHCC-3′)。革兰氏染色液(上海科兴生物科技有限公司),TPY液体培养基,MRS 液体培养基(杭州百思生物科技有限公司),S021乳酸菌生化鉴定套装(北京路桥技术有限责任公司) 。……
