王娜邹明静(

1.商丘医学高等专科学校,河南商丘 476000;2. 菏泽医学专科学校,山东菏泽 274030)

转铁蛋白的分析进展

王娜1邹明静2(

1.商丘医学高等专科学校,河南商丘 476000;2. 菏泽医学专科学校,山东菏泽 274030)

综述了目前国内外测定转铁蛋白的多种方法,探讨其原理并分析比较了方法的优缺点;简单介绍了转铁蛋白测定的临床意义。

转铁蛋白 分析方法 临床意义

转铁蛋白又称为铁传递蛋白、运铁蛋白(TRF)是血浆中主要的含铁蛋白质,主要由肝细胞合成。Tf是体液中不可缺少的成分,不仅参与铁的运输与代谢,参与呼吸、细胞增殖和免疫系统的调节,而且能调节铁离子平衡和能量平衡,还具有抗菌杀菌的自我保护的抗病功能,是抑制细菌繁殖的重要因子,因而Tf具有较全面的蛋白质生理功能。现有多种方法应用于对血清转铁蛋白的测定。

1 转铁蛋白的分析方法

目前测定Tf的免疫方法有火箭免疫电泳、放射免疫分析(RIA)、酶联免疫分析(ELISA)、荧光酶免疫分析,电化学免疫分析,毛细管区带电泳,表面等离子共振(SPR),压电免疫分析,免疫比浊法、共振散射法等。

1.1 火箭免疫电泳法(RIR)[1]

此法灵敏度较低,在实验过程中琼脂糖板与电泳条件要严格控制一致,否则重现性较差。

1.2 放射免疫分析(RIA)[2]

放射免疫分析(Radio Immunoassay,RIA)是用放射性同位素标记抗原Ag*与未标记抗原Ag竞争结合过量的抗体(Ab),则生成的Ag*-Ab复合物就与Ag的量呈负相关;Ag增加,则Ag*-Ab.减少;反之Ag *-Ab上升,Ag*-Ab的生成量可通过测定其放射活性得到。因此,如果测定出样品的放射活性,就可根据已知浓度抗原的标准曲线计算出样品中抗原浓度,这种分析方法称为放射免疫分析。若是用放射性同位素标记的抗体Ab*与样品中的抗原Ag反应,然后用固相抗原免疫吸附剂去掉未结合的Ab*测定上清液中的放射活性就可计算出生成Ag-Ab*的量,此量与样品中抗原的量成正比,以此计算出样品抗原浓度。放射性同位素对人体有害。

1.3 酶免疫分析法

何涛等[3]建立了人血清转铁蛋白的竞争性酶联免疫测定法(CEIT),可以测定到纳克水平。Yasser Perera等基于两种对鼠类血清转铁蛋白无交叉反应的单克隆抗体建立了一种酶联免疫双抗体夹心法测鼠血清中的人转铁蛋白浓度,测得线性范围为25-400ng/ ml,检出限为10ng/ml。此方法灵敏度很高,但操作复杂,费时。

1.4 荧光酶免疫分析

免疫荧光检测法是以荧光物质作为标记物,与已知的抗体(或抗原)结合,但不影响其免疫学特性,根据荧光的存在与否来检测抗原或抗体,用于检测和鉴定未知的抗原,经与标准品对照而得到分析物的浓度。Li等过氧化物酶标抗原和未标记抗原竞争和固定抗体反应,过氧化物酶催化过氧化氢氧化PCP生成一种新的荧光物质进行检测,大大增强荧光信号。

1.5 表面等离子共振(SPR)

SPR是一种物理光学现象,当一束平面单色偏振光在一的角度范围内照射到镀在玻璃表面的金属薄膜上发生全射时,其入射光的波向量与金属膜内表面电子(称为等离体)的振荡频率相匹配时,光线被耦合进入金属膜,引起电发生共振,即表面等离子体共振。Liu xia等基于表面等离子共振传感器用金纳米粒子和双层传感膜增大共振波长变化来提高灵敏度,金纳米粒子不是用来标记,而是用来加强SPR信号的双分子作用的组成部分。

1.6 压电免疫分析

压电免疫传感器的基本原理就是将抗体或抗原固定于石英晶体表面,利用抗原与抗体的特异亲合反应, 当待测的抗原或抗体与所固定的识别物相互作用而产生特异吸附时,就会导致晶体表面质量负载的增加,所吸附的抗体或抗原的量可以通过传感器的频率变化加以监测。王桦等建立一种基于等离子体聚合膜、结合聚电解质设计的压电免疫传感器测定人血清中转铁蛋白,将其用于实际样品中转铁蛋白的测定,结果与酶联免疫法基本一致。

1.7 电免疫传感器

Hu Shun-Qin等基于金表面的低聚物层建立一种定量测定电免疫传感器方法,在电化学作用下邻氨基苯硫醇在多晶的金表面形成的自组装层被聚合,同时在金表面也有氨基自由基生成,转铁蛋白抗血清被共价偶联在金表面,并不影响其生物活性。在溶液中含有抗体的混合结构电极与抗原反应导致低聚物层电介质增加,电信号的降低与抗原的量成线性。

1.8 毛细管电泳

Tünde Konecsni等通过用毛细管区带电泳成功对异硫氰酸荧光黄(FITC)标记转铁蛋白的交联反应进行监测。在碱性条件下, FITC的异硫氰基与抗体蛋白的自由氨基竟碳酰胺化而形成稳定的硫碳氨基键,成为荧光素标记抗体,转铁蛋白的检出限为10ng/ml。

1.9 共振散射法

在聚乙二醇的作用下,羊抗人TRF和血清TRF特异性结合形成免疫复合物微粒,使相应的各同步散射峰的共振散射强度大大增强,在470nm测定线性范围为0.10-2.50μg/mL;杨培慧等利用碳二亚胺将抗TRF化学偶联到已修饰了半胱胺的金纳米表面,制备了抗TRF-纳米金免疫探针,再与血清TRF特异性结合形成更大的免疫复合物微粒,使470处的散射峰明显增强,检测下限为8.5×10-11mol/L,提高了对血清TRF测定的灵敏度。

2 临床意义

血清TRF的测定,对于贫血的诊断和治疗,肝、肾疾病的病情观察和预后判断有重要的临床意义。若患者出现缺铁性贫血、急性肝炎、急性炎症、口服避孕药、妊娠后期等症状时,血清转铁蛋白含量增多;若患者出现肾病综合征、肝硬化、恶性肿瘤、溶血性贫血、营养不良等症状时,血清转铁蛋白含量减少,常随着白蛋白、前白蛋白同时下降,因此可以作为评价营养状况和衡量机体抗感染能力可靠指标。

[1]张彬.火箭电泳法测猪血浆转铁蛋白含量[J].畜牧与兽医,1992, 24(2):56.

[2]吴婵群,江一民,李尹民.转铁蛋白放射免疫分析法的建立及其初步应用[J].核技术,1993,16(11):653-656.

[3]何涛,吴明泸,罗文炽,杨烨,刘友平,周志远.人血清转铁蛋白酶联免疫测定法的研究[J].泸州医学院学报,1999,22(2):99-101.