王红钢,张相红,赵 帅

(1.河南大学医学院生物化学与分子生物学教研室,河南开封475004;2.河南大学第一附属医院,河南开封475004;3.开封市中医院,河南开封475000)

重复序列竞争反式调节因子模型的构建和初步研究

王红钢1,张相红2,赵 帅3

(1.河南大学医学院生物化学与分子生物学教研室,河南开封475004;2.河南大学第一附属医院,河南开封475004;3.开封市中医院,河南开封475000)

目的 构建不同拷贝数的重复串联序列表达质粒,研究串联重复序列对表达质粒中GFP报告基因表达的影响作用。方法 将不同拷贝数的2F2R、AC和AT串联重复序列插入p EGFP-Alu14或p EGFP-C1中,构建表达载体,瞬时转染HeLa细胞,提取RNA做Northern印记检测。结果 在4个拷贝数范围以内,2F2R随拷贝数增加活化基因作用增强,再增加拷贝数其活化基因作用反而下降;装有重复序列的质粒随转染剂量上升表达先上升后下降。结论 重复序列可能通过竞争反式调节因子来调节基因表达。

重复串联序列;GFP;Northern blot;转染

哺乳动物基因组中有将近98%的序列属于不编码蛋白质的非编码序列,而大肠杆菌基因组中非编码序列约占11%。大部分非编码序列的功能还未搞清楚,曾被认为是“垃圾序列”[1]。但近些年的研究[2-3]表明,非编码序列不仅在调控基因表达,甚至在生物进化中都有着非常重要的作用。因此研究非编码序列对了解基因表达调节的机制、进而探寻非编码序列新的生物学功能以及认识人和哺乳动物的生物学行为,包括分化和衰老,都有重要价值。基因侧翼的非编码序列包含重要的调控元件,包括转录终止信号、增强子、5′UTR和3′UTR等,对基因表达调节产生重要影响[4-5]。……