周斌，李媛媛

（保定市第三医院胸外科，河北 保定 071000）

胸部肿瘤患者常因肿瘤病因和类型的不同以及个体差异等原因，对化疗药物的敏感性有较大差异。为了减少临床对化疗药物选择的盲目性，实行个体化治疗，化疗前预测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性显得尤为重要[1]。为此，保定市第三医院开展了四噻唑蓝法体外肿瘤细胞药敏试验，对16种常用化疗药物进行分析。对保定市第三医院近期试验数据进行总结，就肿瘤细胞对部分化疗药物的敏感性提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 细胞来源

近期胸外科手术的肿瘤组织，包括肺癌、食管癌变组织。挑选瘤细胞集中和活性好的部位，将切下的肿瘤组织立即放入装有培养液的无菌容器内，4 ℃保存，12 h 内使用。

1.1.2 培养基和试剂

改良型RPMI1640培养基（海克隆生物化学制品有限公司）、新生牛血清（北京元亨圣马生物技术研究所），四氮唑盐（MTT）（Amresco）、二甲基亚砜（天津市恒兴化学试剂制造有限公司）。

1.1.3 试验药物

顺铂（20µg/mL）、卡铂（100µg/mL）、草酸铂（30µg/mL）、盖诺（40µg/mL）、环磷酰胺（1 000µg/mL）、异环磷酰胺（2 500µg/mL）、长春新碱（10µg/mL）、羟喜树碱（20µg/mL）、依立替康（300µg/mL）、紫杉醇（125µg/mL）、多西紫杉（60µg/mL）、依托铂苷（100µg/mL）、氟尿嘧啶（200µg/mL）、吡柔比星（50µg/mL）、多柔比星（60µg/mL）、表柔比星（10µg/mL）。

1.1.4 仪器

Kendro BB15 CO2培养箱、Multiskan MK3酶标仪。

1.2 方法

1.2.1 肿瘤细胞的制备

（1）无菌条件下剔除坏死组织及正常组织，用生理盐水冲洗2次；（2）充分剪碎肿瘤组织，经200目不锈钢网挤压过滤，收集细胞；（3）将细胞悬液加入离心管中，1 000 r/min离心5 min；（4）用生理盐水理性离心洗涤2次，弃上清，加入适量培养基重新悬浮细胞。

1.2.2 药敏试验

（1）立即将肿瘤细胞悬液以103～104微升/孔接种于96孔培养板（200微升/孔），同时加入事先确定的各种化疗药物。在37℃、5% CO2培养箱中培养24～48 h。（2）每孔加入MTT（5 mg/mL）10µL，37 ℃作用12 h。（3）1 500 r/min离心5 min，弃去上清。每孔加入DMSO 100µL，振荡，使蓝紫色沉淀充分溶解，用酶标仪在波长490 nm处测定吸光度（A）。（4）各药物组设3个平行孔，实验重复3次，取平均值计算药物作用后肿瘤细胞生长抑制率，公式如下：细胞生长抑制率（%）=（A对照组-A实验组）/A对照组×100%。

2 结果

将细胞生长抑制率结果列表，并计算出敏感率，排序发现肺鳞癌对16种化疗药物敏感率高的为：草酸铂（60%），顺铂、环磷酰胺、紫杉醇（40%）。肺腺癌对16种化疗药物敏感率高的为：盖诺、紫杉醇、氟尿嘧啶（63%）（表1）。食管鳞癌对16种化疗药物敏感率高的为：盖诺、长春新碱、羟喜树碱（75%）（表2）。

表1 肺癌 （13例）对16种试验化疗药物的敏感率

表2 食管鳞癌（4例）对16种试验化疗药物的敏感率

3 讨 论

肿瘤药物敏感试验出现较早，其主要目的在于化疗前预测药物对肿瘤的敏感性，从而淘汰无效化疗药物，实现个体化化疗，提高肿瘤的化疗效果。近年来随着细胞培养技术的不断提高，药物敏感试验方法的不断改进。特别是MTT法的出现与成熟，肿瘤药物敏感试验成为肿瘤治疗研究中的热点之一[2]。对肺癌有效的抗肿瘤药很多，包括紫杉类、喜树碱衍生物CPT-11（依立替康）和长春瑞宾（盖诺）等。草酸铂对非小细胞肺癌（NSCLC）有一定疗效，有效率为10%～26%[3]。表柔比星作为单药治疗NSCLC，有效率只有7%[3]，但体外肿瘤细胞药敏试验显示对NSCLC也具有较高的敏感率。本实验结果显示，肺鳞癌对16种化疗药物敏感率高的为：草酸铂（60%），顺铂、环磷酰胺、紫杉醇（40%）。肺腺癌对16种化疗药物敏感率高的为：盖诺、紫杉醇、氟尿嘧啶（63%），顺铂、依立替康、表柔比星（50%）。食管鳞癌对16种化疗药物敏感率较高的为：盖诺、长春新碱、羟喜树碱（75%），卡铂、依立替康、紫杉醇、氟尿嘧啶、吡柔比星（50%）。

MTT药敏试验仍然存在着假阳性及假阴性，使试验的特异性有一定的误差[4]，可能与以下因素有关：（1）体外培养的为原代肺癌细胞，不象细胞株那样，具有很强生长和增殖能力，有一部分细胞在体外会因为环境的变化而不适应，自然死亡，且有一部分细胞在分离过程中受到机械性损伤；（2）体内外环境不一样，体内较复杂，存在影响化疗药物代谢及作用的因素；（3）体内外提供细胞损伤后修复的环境不一样，在体外肿瘤细胞的修复能力下降；（4）体外细胞处于机械损伤和环境损伤状态[5]。但就目前众多药敏试验方法中，它以较高的临床相关性以及符合率，方法简便又经济的特点为广大医院所接受。以药敏实验结果为依据进行个体化治疗，可望提高疗效，减少无效药物的投入，减少毒副作用的发生，并且有可能提高患者生存率。

4 结论

通过体外肿瘤细胞对常用化疗药物敏感性的分析，为临床对化疗药物的选择提供参考，从而减少临床对化疗药物选择的盲目性，更好地实行个体化治疗，体外肿瘤细胞药敏试验对化疗药物的合理选择具有指导意义。

[1]季宇彬, 周建华, 左明新, 等. 新型 TopoⅠ抑制剂 CPUY013 对胃腺癌细胞 BGC823 的体内外作用[J]. 药学学报, 2008, 43(8):811-818.

[2]IYISOY A, AMASYALI B, KILIC A, et al. Relationship be-tween noni-nvasive reperfusion criteria and pulsed-wavetissue Dopplerparameters in patientswith acutemyocardialinfarction receiving thrombolytic therapy[J]. Echocardio-graphy, 2003, 20(3):237-248.

[3]张翠卿. 肿瘤体外药敏试验与临床优化治疗方案的研究进展[J]. 四川肿瘤防治, 2006, 19(4): 281.

[4]段国辰, 杜锦波, 牛占丛. 肿瘤细胞体外药敏试验临床研究进展[J]. 河北医药, 2012, 34(21): 3304-3306.

[5]刘敏, 王朝晖. 体外肿瘤细胞培养法对非小细胞肺癌化疗药物敏感性的研究[J]. 临床医学, 2009, 29(12): 66.