曾耀明 郑伟伟 余维微 陈余圣 林上助 浙江中医药大学附属温州中医院消化科 温州 325000

升阳益胃汤对腹泻型肠易激综合征模型大鼠血钙基因相关肽及5-羟色胺的影响

曾耀明 郑伟伟 余维微 陈余圣 林上助 浙江中医药大学附属温州中医院消化科 温州 325000

目的 观察升阳益胃汤对腹泻型肠易激综合征（IBS）大鼠血浆钙基因相关肽（CGRP）、血清5-羟色胺（5-HT）的影响。方法 取清洁级健康雄性SD大鼠60只，其中10只为空白对照组，60只采用束缚应激+夹尾刺激法诱导腹泻型IBS大鼠模型，造模成功后随机分为模型对照组、得舒特组及升阳益胃汤低、中、高剂量组，各10只，观察大鼠稀便率，放免法检测大鼠血浆CGRP、血清5-HT含量。结果 升阳益胃汤治疗后，大鼠稀便率下降，与模型组、得舒特组相比，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；模型组大鼠血清5-HT水平明显高于空白组，血浆CGRP水平则稍低于空白组（P＜0.05）；治疗后得舒特组、升阳益胃汤各剂量组血清5-HT均较模型组明显下降（P＜0.05），而各组之间血浆CGRP水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 升阳益胃汤能明显减轻腹泻型IBS模型大鼠腹泻症状，减少腹泻型IBS模型大鼠血清5-HT的合成和分泌，但对血CGRP无明显影响。

大鼠；肠易激综合征；升阳益胃汤；钙基因相关肽；5-羟色胺

肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一类常见的功能性胃肠病，以慢性反复发作的腹痛、腹部不适伴有排便习惯改变为特征。西药治疗效果不甚理想，我们近年发现升阳益胃汤对腹泻型IBS患者效果显著，但作用机制不明，故本研究拟观察升阳益胃汤对腹泻型肠易激综合征模型大鼠的治疗作用，并探讨其作用机制。现报道如下。

1 实验材料

1.1 实验动物 10周龄健康清洁级雄性SD大鼠60只，体质量（300±20g）。许可证号：SCXK（浙）2010-0150，由温州医科大学实验动物中心提供。所有动物在有恒定温度、湿度及昼夜光线的房间饲养，自由进食、进水。适应性饲养3天后进行实验。饲养期间每日8:00～16:00时给予恒定灯光照明。

1.2 药品及试剂 升阳益胃汤由黄芪、半夏、人参、甘草、独活、防风、白芍等14味药物组成，购买于温州市中医院中药房，并由我院制剂室制备。得舒特片（化学成分匹维溴铵，法国苏威制药厂生产，规格：50mg/片，注册证号H20040759）。大鼠5-HT放免试剂盒（北京解放军总医院东北免疫技术研究所）；大鼠CGRP放免试剂盒（北京解放军总医院东北免疫技术研究所）。

1.3 主要器材 MJ-182型放射免疫γ计数器（上海原子核研究所日环仪器厂生产）；Allegra25R型台式高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特出品）；BX51型反射荧光显微镜（OLYMPUS）。

2 实验方法

2.1 动物分组 60只SD大鼠随机分为空白对照组10只和造模组50只，待造模成功后再随机分为模型组、得舒特组和升阳益胃汤低、中、高剂量组，每组10只。

2.2 模型制作 参照文献[1]方法，以束缚应激+夹尾刺激法诱导腹泻型IBS大鼠模型。具体操作步骤如下：造模组大鼠每10只同笼，用纱布条束缚其后肢，使大鼠活动受到一定程度限制，并用裹有海绵的夹子夹大鼠尾巴近端1/3处，注意不损伤皮肤，使其激怒，寻衅与其它大鼠撕打，从而激怒全笼打斗，观察大鼠激怒应激反应，刺激时间持续30min，每次都增加5min。空白对照组不予处理，常规饲养。造模时间共14天。

2.3 给药方法 造模成功后第2天起，各组大鼠分别灌胃给药，实验剂量按照试验动物研究“等效剂量”的计算方法[2]。各组大鼠分别灌2mL溶液:其中升阳益胃汤高、中、低剂量组分别含生药量为3、1.5、0.75g/mL；得舒特组用蒸馏水配制成40mg/mL混悬液，给药体积为20mL/（kg·d）；空白对照组和模型对照组灌服生理盐水作为安慰对照。每天1次，各组连续给药14天。

2.4 观察指标

2.4.1 大鼠稀便率 各用药组和模型组治疗后每天记录大鼠的稀便次数及总大便数。干便与稀便的区分以滤纸上有无污迹为标准，总和稀便率=总和稀便次数/总和大便次数，实验结束统计分析各组大鼠的总和稀便率。

2.4.2 血清5-HT含量、血浆CGRP含量测定 大鼠经水合氯醛麻醉后，于颈总动脉取血放射免疫法分别测定血清5-HT含量、血浆CGRP含量，严格按照试剂盒操作步骤进行。

2.4.3 小肠病理组织学检查 用颈椎脱位断髓法分别处死大鼠后，沿腹部正中切开，分离小肠组织，用10%福尔马林固定，石蜡包埋，蜡块以4μm厚连续切片，常规伊红染色。

2.5 统计学方法 应用SPSS19.0软件进行统计分析，计量资料用（±s） 表示，采用单因素方差分析，首先进行方差齐性检验，当方差齐性时用Bonferroni法进行比较，当方差不齐时用Tamhane’s T2法。

3 实验结果

3.1 一般情况观察 造模组大鼠第7天开始逐渐出现神疲乏力，活动减少，四肢无力，背毛逐渐失去光泽，喜卧嗜睡,腹泻等症状。于造模第14天大鼠出现双目无视，外观干瘪瘦小，被毛枯槁，竖毛拱背，乏力懒动，大便稀溏等表现，证明造模成功。空白对照组大鼠眼睛有神，活动快速，形体饱满，被毛浓密而有光泽，饮食、饮水适中，大小便正常。得舒特组大鼠于治疗后第5天起大鼠腹泻症状减轻，大便数量减少、质变硬，乏力懒动表现未见明显改善。升阳益胃汤低、中、高剂量组大鼠于治疗后第7天起，一般情况逐渐好转，进食量增加，活跃情况增强，毛色渐光泽，腹泻症状减轻，大便数量减少、质变硬，其中大剂量组较小剂量组改善明显。

3.2 各组大鼠稀便率比较 与空白组比较，模型组大鼠稀便率明显增加（P＜0.05）；与模型组比较，得舒特组、升阳益胃汤低、中、高剂量组稀便率均显著降低（P＜0.05，P＜0.01），升阳益胃汤中、高剂量组稀便率显著低于得舒特组（P＜0.05），低剂量组稀便率虽低于得舒特组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；升阳益胃汤各剂量组比较，高剂量组优于中、低剂量组（P均＜0.05）。见表1。

3.3 各组大鼠血清5-HT、血浆CGRP水平比较 与空白组比较，模型组、得舒特组、升阳益胃汤低剂量组血清5-HT水平均显著增高（P均＜0.05）；与模型组比较，得舒特组、升阳益胃汤低、中、高剂量组血清5-HT水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；与得舒特组比较，升阳益胃汤中、高剂量组5-HT水平显著降低（P均＜0.05）；升阳益胃汤高剂量组5-HT明显低于中、低剂量组（P＜0.05）。见表2。

表1 各组大鼠稀便率比较（±s）

表1 各组大鼠稀便率比较（±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与得舒特组比较，▲P＜0.05；与升阳益胃汤中、低剂量组比较，★P＜0.05

组别n/只 稀便率/%空白组模型组得舒特组升阳益胃汤低剂量组升阳益胃汤中剂量组升阳益胃汤高剂量组10 10 10 10 10 10 14.34±3.36 23.48±6.32* 16.30±5.58△14.76±3.32△11.91±2.54△▲8.50±4.46△△▲★

模型组CGRP水平显著低于空白组（P＜0.05），各实验组CGRP水平显著高于模型组（P均＜0.05）；各实验组间CGRP水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 各组大鼠血清5-HT、血浆CGRP水平比较（±s） ng/L

表2 各组大鼠血清5-HT、血浆CGRP水平比较（±s） ng/L

注：与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05；与得舒特组比较，▲P＜0.05；与升阳益胃汤中、低剂量组比较，★P＜0.05

组别空白组模型组得舒特组升阳益胃汤低剂量组升阳益胃汤中剂量组升阳益胃汤高剂量组n/只10 10 10 10 10 10 5-HT 137.34±17.96 203.71±34.62* 165.30±17.58*△160.88±14.59*△145.36±13.57△▲128.50±15.46△△▲★CGRP 42.06±1.65 38.36±2.22* 44.10±1.44△43.20±3.19△43.51±2.87△42.29±3.08△

3.4 各组大鼠小肠病理组织学检查 各组大鼠小肠未见明显组织损伤，组织切片普通HE染色均有轻度的中性粒细胞浸润，间质无明显水肿，属于轻度，见图1（封三）。

4 讨论

国内报道IBS患病率约为0.82%～5.67%[3]。IBS发病与胃肠道动力异常、内脏高敏感性、肠道炎症和免疫反应、心理-社会因素等有关，其中内脏高敏性增高是其特征性的主要病理生理基础[4]。

5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）又称为血清素，来源于色氨酸的代谢，人体大约95%的5-HT来源于肠道，其中90%的5-HT储存于肠嗜铬细胞（enterochromaffincell，EC）中，10%存在于肠神经系统，其能激动胃肠道平滑肌5-HT2受体或肠壁内神经节细胞5-HT4受体均可以引起胃肠道平滑肌收缩，使胃肠道张力增加，肠蠕动加快。近年研究发现5-羟色胺系统改变与IBS患者腹痛、腹泻和内脏感觉异常等症状密切相关[4]。本实验结果发现，与空白组比较，造模成功后模型组血清5-HT水平显著升高（P＜0.05）。而模型大鼠经药物治疗后，升阳益胃汤组及得舒特组血清5-HT水平降低（P＜0.05），说明通过应用升阳益胃汤可能通过调控肠道5-HT的合成和分泌，而改善大鼠的腹泻症状，而升阳益胃汤各组又较得舒特组有更优的治疗效果，血清5-HT下降也更为明显。

钙基因相关肽（calction generelated peptide，CGRP）是一种脑肠肽，广泛分布于外周、中枢及肠神经系统，在心血管、神经、运动及消化系统中都起着重要作用。研究显示，CGRP在胃肠道不仅介导痛觉产生和痛觉过敏，而且也能调节胃肠运动功能[5]。本研究结果表明，与空白组比较，模型组血浆CGRP水平显著降低（P＜0.05），而其余各组所测得结果并无统计学差异（P＞0.05），提示在以后的IBS治疗研究中血中CGRP水平可能不适合用作判断疗效的指标。

中医无“肠易激综合征”病名，根据其临床表现与特征，属于中医“肠郁”、“泄泻”、“便秘”、“腹痛”等范畴。该病发病机错综复杂，中医认为多为情志失调、肝郁虚，或饮食所伤，脾胃虚弱。升阳益胃汤出自金·李东垣的《脾胃论》，由黄芪、半夏、人参、甘草、独活、防风、白芍等14味药物组成，有益气升阳、清热除湿之功，适用于脾胃虚弱而湿邪不化，阳气不升之证，症见倦怠嗜卧，四肢无力，食不知味，泄泻等症。本研究发现，升阳益胃汤各剂量组均能有效降低腹泻型IBS大鼠血液中的5-HT含量，且能有效缓解腹泻症状，改善大鼠的生存状态，且优于西药得舒特组，但对血中CGRP的含量未见明显影响。升阳益胃汤对IBS的治疗机制可能与调控肠道5-HT合成和分泌有关，其疗效与用药剂量相关。

［1］Williams CL，Villar RG，Peterson JM，et al.Stress-induced changes in intestina1 transit in the rat：a mode1 for irritable bowe1 syndrome［J］.Gastroenterology，1988，94（3）：611-21.

［2］赵伟，孙国志.不同种实验动物间用药量换算［J］.畜牧兽医科技信息，2010，（5）：52-53.

［3］何宛蓉.肠易激综合征流行病学研究现状与进展［J］.胃肠病学与肝病学杂志，2012，21（1）：83-88.

［4］周应初，周鹤俊，刘斌.5-HT在肠易激综合征发病机制中的研究现状［J］.胃肠病学，2011，16（7）：445-448.

［5］陈羽，罗和生，梁成柏，等.肠易激综合征血清中降钙素基因相关肽的变化［J］.胃肠病学和肝病学杂志，2011，20（7）：653-655.

Effect of Shengyang Yiwei Decoction on Serum CGRP and 5-hydroxytryptamine in Rats with Irritable BowelSyndrome

ZENG Yaoming,ZHENG Weiwei,YU Weiwei,CHEN Yusheng,LIN Shangzhu.Department of Gastroenterology,Wenzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Wenzhou(325000),China

Objective To investigate the effect of Shengyang Yiwei decoction on serum CGRP and 5-hydroxytryptamine（5-HT）in rats with irritable bowel syndrome（IBS）.Methods Sixty SPF SD rats were randomly divided into normal control group,model group,dicetel group,Shengyang Yiwei decoction group（low,moderate,and high dose）with 10 rats in each group.Except for normal control group,the model of IBS was made by binding stress and clasping rats tails in other groups.Changes of diarrhea rate were observed.Radioimmunoassay was used to detect the level of CGRP and 5-HT in plasma.Results The diarrhea rates in Shengyang Yiwei decoction groups were decreased after treatment as compared with that in model group and dicetel group（P＜0.05,P＜0.01）.The content of 5-HT in plasma in model group was higher than that in normal control group,while the level of CGRP in model group was lower than that in normal control group（P＜0.05）.After treatment,the contents of 5-HT in plasma in dicetel group and Shengyang Yiwei decoction group were decreased than those in model group（P＜0.05）,while the levels of CGRP had no statistical significance among all groups（P＞0.05）.Conclusion Shengyang Yiwei decoction can alleviate the symptom of diarrhea,inhibit 5-HT synthesis and secretion,but does not affect the level of CGRP in rats with IBS.

rats；irritable bowel syndrome；Shengyang Yiwei decoction；CGRP；5-hydroxytryptamine

2014-03-20

修回日期：2014-06-04

浙江省温州市医药卫生科研项目（No.2011A014）

曾耀明，Tel：13867704929，0577-88223631；E-mail：sunnyzeng2012@hotmail.com