代 晶，石明芯，王佳慧

儿茶酚氧甲基转移酶(COMT)是生物体内重要的Ⅱ相代谢酶，能够通过S-腺苷-L-甲硫氨酸使药物发生甲基化反应，对其药代动力学和药效学产生影响。除此以外，其活性高低还与帕金森、精神分裂症、抑郁症、乳腺癌、白癜风等疾病存在相关性［1-3］。因此，测定COMT活性对于研究药物与COMT的关系，诊断和治疗某些疾病具有重要意义。COMT在肝中活性最高，而肝微粒体中含有丰富的Ⅱ相代谢酶，为了测定肝微粒体中COMT的活性，本试验建立了同时测定COMT的底物(原儿茶酸)和其代谢产物(香草酸)含量的HPLC法。该方法简单、灵敏、准确，可为COMT相关研究提供有效的分析手段。

1 材料

1.1 试剂 绿原酸(批号CAA-111101)购自成都天源天然产物有限公司;原儿茶酸(批号 Y-031-132012)和香草酸(批号X-030-120316)购自成都瑞芬思生物科技有限公司;甲醇(Dikma公司，色谱纯)，其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器 Ultimate3000型高效液相色谱仪(美国Dionex公司):包括 P680泵、ASI-100自动进样器、UV1700型检测器，TC100柱温箱，Chromeleon工作站。

1.3 实验动物 健康成年的SD大鼠8只，雌雄各半，体重250～300 g，购自四川大学华西实验动物中心，合格证号SYXK(川)2008-113。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制 分别取原儿茶酸、香草酸对照品适量，用甲醇稀释成质量浓度分别为1.0、0.75 mg/ml的贮备液。取上述贮备液适量，用甲醇稀释成系列浓度的对照品溶液，其中原儿茶酸的质量浓度分别为200、100、50、20、10、5 μg/ml，香草酸分别为 150、75、37.5、15、7.5、3.75 μg/ml。取绿原酸(内标)对照品适量，用甲醇稀释成质量浓度为200 μg/ml的溶液。上述溶液置4℃冰箱，备用。

2.2 肝微粒体的制备与测定 参考文献［4］的方法制备大鼠肝微粒，并测定蛋白浓度。……