陈昌明，刘慧芳，曹雪姣，李新莉，辛毅，张翠丽（大连医科大学生物技术系，辽宁 大连 116044）

姜黄素（Curcumin）是从姜科姜黄属植物姜黄（Curcuma longa）根茎中提取的一种酚性色素，具有抗炎、抗氧化、降脂、抗病毒、清除自由基的作用[1-2]，同时还可抑制小鼠肉瘤S180、人大肠癌细胞HT29、肾癌细胞293、肝癌细胞HepG2细胞生长[3-5]。有文献报道，姜黄素可抑制酪氨酸蛋白激酶（PTK）活性，从而抑制肿瘤细胞增殖，并通过阻断细胞信号传导途径促发细胞凋亡[6]。本研究通过姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制、促凋亡和细胞周期各时相的变化以及抑癌基因p53蛋白的表达影响的研究，为姜黄素的抗癌研究和应用提供实验依据。

1 材料

1.1 仪器

E100型倒置相差显微镜[尼康仪器（上海）有限公司]；CO2孵箱、MK3型酶标仪（美国Thermo公司）；FC500型流式细胞仪（美国Beckman公司）。

1.2 药材

姜黄于2012年4月购于大连中药店，经大连医科大学生物技术系李新莉讲师鉴定为真品。

1.3 药品与试剂

姜黄素对照品（天津一方科技有限公司，批号:20121259，纯度:≥98%）；MTT（美国Amresco公司）；抗体β-actin、p53、HRP辣根过氧化物酶（武汉博士德生物工程有限公司）。

1.4 细胞

人宫颈癌Hela细胞株由大连医科大学生物技术系实验室提供。

2 方法

2.1 姜黄素的提取

姜黄置50Ⅸ恒温干燥箱过夜，粉碎过200目筛网。姜黄粉末按1∶10（m/V）加入70%乙醇浸提48h，抽滤浸提液，旋蒸，等分提取物分别以酸碱法和萃取法提纯，计算得率[7]。姜黄提取液置－20Ⅸ贮藏，备用。

2.2 姜黄提取液质量浓度的测定

准确称取20mg姜黄素对照品，加入200μl甲醇溶解得姜黄素对照品溶液（100mg/ml）。定量移取姜黄素对照品溶液（100mg/ml）适量，甲醇逐级10倍稀释至0.1mg/ml；……