张敏,杨剑,韦欣,龙庆德

(1.贵阳医学院药学院,贵阳 550004;2.贵阳医学院附属医院药剂科,贵阳 550004)

贵州产小花清风藤不同部位槲皮素含量比较*

张敏1,杨剑1,韦欣2,龙庆德1

(1.贵阳医学院药学院,贵阳 550004;2.贵阳医学院附属医院药剂科,贵阳 550004)

目的 比较贵州产小花清风藤茎、叶、全株中槲皮素的含量差异。方法采用高效液相色谱法,岛津WondaSil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-0.1%磷酸(55∶45)为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长360 nm。结果槲皮素在2.8～67.2 μg·mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.999 7,n=5),小花清风藤的不同部位槲皮素的平均含量为:茎0.614 mg·g-1(RSD=1.8%)、叶2.593 mg·g-1(RSD=2.3%)、全株1.995 mg·g-1(RSD= 1.8%);槲皮素在茎、叶、全株不同部位的加样回收率分别为101.5%(RSD=1.06%)、101.0%(RSD=1.83%)、107.8% (RSD=1.59%)。结论该方法简便,准确,可靠。贵州产小花清风藤不同部位斛皮素的含量叶＞全株＞茎。

小花清风藤,贵州产;槲皮素;含量测定

小花清风藤(Sabia parvifloraWall.ex Roxb)为清风藤科清风藤属的常绿木质藤本。贵州产小花清风藤为布依族、苗族的民间药,有清热利湿、祛风镇痛的功效,民间常用其根茎入药治疗急性黄疸性肝炎和风湿劳伤[1]。槲皮素作为小花清风藤中有效成分之一,具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗血小板聚集和清除自由基等多种生物活性[2]。因此,笔者采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定贵州产小花清风藤中槲皮素的含量,并对其茎、叶、全株不同部位的槲皮素含量进行比较。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(Agilent1100)。槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100081-200907),小花清风藤原材采自贵州望谟,经贵阳医学院生药学教研室龙庆德副教授鉴定为清风藤属植物小花清风藤(Sabia parvifloraWall.ex Roxb)。甲醇(色谱纯),水为超纯水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:岛津WondaSil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(55∶45);检测波长:360 nm;柱温:30℃;流速: 1 mL·min-1;进样量:10 μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品适量,置25 mL量瓶中,用甲醇溶解并定容,制成浓度为0.224 0 mg·mL-1的槲皮素对照品溶液。

2.3 样品溶液的制备 分别精密称取小花清风藤茎、叶、全株细粉1 g,置于圆底烧瓶中,加入甲醇50 mL摇匀,再加入35%盐酸5 mL,水浴加热回流提取2 h,抽滤,取滤液至50 mL量瓶,用甲醇定容,摇匀即得[3]。

2.4 系统适应性实验 分别精密取对照品溶液和样品溶液,按照“2.1”项色谱条件进样分析,记录色谱图,结果见图1。

2.5 线性关系考察 精密量取“2.2”项对照品溶液分别取1.25,2.5,5,10,30 mL用甲醇定容至100 mL量瓶,得到浓度为2.8,5.6,11.2,22.4,67.2 μg·mL-1的对照品溶液,按上述色谱条件分别进样10 μL,测定对照品峰面积,以峰面积为纵坐标,槲皮素对照品溶液浓度为横坐标进行线行回归,得回归方程Y=46.722X-32.465,r=0.999 7(n=5)。结果显示槲皮素在2.8～67.2 μg·mL-1与峰面积呈良好线性关系。

2.6 精密度实验 取同一样品溶液,重复进样5次,每次10 μL,测定槲皮素的峰面积,RSD为1.01%(n= 5)。

2.7 稳定性实验 取同一样品溶液,按上述色谱条件分别在0,2,4,6,12 h进样,每次10 μL,以槲皮素峰面积计算RSD为1.09%(n=5),结果表明样品溶液在12 h内稳定性良好。

2.8 加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批次药材茎、叶、全株0.5 g各3份,分别加入槲皮素对照品0.300,1.300,1.100 mg,按“2.3”项样品溶液的方法制备,测得小花清风藤不同部位槲皮素含量,计算回收率。结果见表1。

2.9 样品含量测定 取3个批次的小花清风藤药材的茎、叶、全株4份样品,按供试品溶液的制备方法制备,依法测定含量,结果见表2。

图1 槲皮素对照品和小花清风藤叶HPLC图

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表1 槲皮素加样回收实验测定结果

表2 小花青风藤药材不同部位槲皮素含量测定(n=4)

3 讨论

本实验中先后选择乙腈-0.5%磷酸溶液,甲醇-水溶液及甲醇-0.1%磷酸溶液等流动相,最后根据分离情况确定采用甲醇-0.1%磷酸溶液(55∶45)作为流动相,该条件下的线性关系、精密度、稳定性及回收率均良好,方法操作简便,准确性好。小花清风藤的不同部位斛皮素含量不同:叶＞全株＞茎,为入药部位的选用和药效学研究提供参考。

[1] 刘易蓉,梁光义,张永萍.高效液相色谱法测定小花清风藤中槲皮素的含量[J].贵州医药,2006,30(4):363-364.

[2] 舒毅,谭陶,张思宇,等.槲皮素的药理学研究进展[J].华西药学杂志,2008,23(6):689-691.

[3] 刘易蓉,梁光义,张永萍.小花清风藤中槲皮素的提取工艺研究[J].贵州医药,2006,30(6):566-567.

DOI 10.3870/yydb.2014.10.034

R282.71

B

1004-0781(2014)10-1379-02

2013-10-22

2013-12-27

*贵州省科学技术厅科技计划基金(黔科合ZY [2011]3009号)

张敏(1974-),女,浙江宁波人,高级实验师,学士,从事药物质量控制研究。电话:0851-6908568,E-mail:gyzm777@163.com。

龙庆德(1963-),男,贵州天柱人,副教授,学士,从事药用植物学和生药学。电话:0851-6908568,E-mail:longqd2007@126.com。