郑 昊， 毛家维， 潘彦博， 刘忠山，刘哲益， 叶明亮， 邹汉法

(1.中国科学院分离分析化学重点实验室，国家色谱研究分析中心，中国科学院大连化学物理研究所，辽宁大连116023;2.中国科学院大学北京100049)

质谱技术由于其高度的自动化水平和快速分析能力被广泛用于复杂生物样品的定性和定量分析中［1］。复杂生物样品用胰蛋白酶酶解后产生C端是精氨酸或赖氨酸的肽段，通过液相色谱-串联质谱分析［2］，经数据库检索，可实现蛋白质的定性或定量分析。1967年Kimmel［3］提出胍基化选择性地发生在赖氨酸侧链氨基上，N端氨基或其他侧链基团不发生此反应。近年来，这一现象在蛋白质定性和定量领域受到了广泛的关注。用胍基化同位素试剂(13C、15N2标记的甲氧脲和12C、14N2标记的甲氧脲)平行处理HeLa细胞蛋白质胰蛋白酶酶解产物，不仅能增加碎片离子信息，而且还可以识别蛋白质C 端［4，5］，利于蛋白质鉴定。另外，利用胍基化保护赖氨酸侧链，再用二甲基化同位素试剂标记肽段N端，利于识别低丰度蛋白质，提高鉴定的可信度［6］。

根据质子转移理论［7］和电荷诱导碎裂原则［8］，肽段含有氨基酸的碱性越高，其捕获质子的能力和保持离子结构稳定的能力越强，就能产生更多的碎裂信息，有利于提高质谱鉴定的灵敏度。由于空间位阻的原因，非N端赖氨酸侧链的氨基选择性地发生胍基化反应，而N端氨基或其他侧链基团则不发生该反应［9］。赖氨酸发生反应后转化为高精氨酸，使其碱性增强，进而可提高含有赖氨酸的肽段的序列覆盖率和鉴定可信度。……