陈旭明 谢鹏飞 史秋盛

（江苏省溧阳市竹箦镇畜牧兽医站，江苏溧阳 213300）

1 实验准备

1.1 软骨细胞来源

原代犬关节软骨细胞进行细胞扩增培养。

1.2 试剂

DMEM/F12培养基，胰蛋白酶，无水乙醇，MTT，环丙沙星盐酸盐等。

2 实验方法

MTT法检测环丙沙星对软骨细胞增殖的影响：取第3代软骨细胞104个/ml密度接种于96孔板，置于CO2培养箱培养。待细胞贴壁后换液培养3 d，加入0.05、0.10、0.15g/L浓度的环丙沙星，于24 h、72 h、120 h检测，测定前4 h弃去旧培养液，加入100 μl无血清DMEM/F12培养液（含5 g/L的MTT10μl），37℃培养箱内孵育4 h，弃去MTT，加入150 μl无水乙醇，振荡10 min，选取490 nm波长，用酶标仪读取OD值，记录数据。

3 实验结果

软骨细胞中加入环丙沙星后，与对照组相比，软骨细胞增殖受到明显的抑制作用，随时间延长抑制作用增大，随着剂量增大抑制作用增大（详见表1和图1），从表中和图中均可以看出，0.15 g/L浓度的环丙沙星抑制软骨细胞增殖作用最大。

表1 环丙沙星对软骨细胞增殖的影响

图1 环丙沙星对软骨细胞增殖的影响

4 实验讨论

目前，对QNs的软骨毒性是否会影响儿童生长发育，是个争议较大的问题，国内外众多的动物实验结果均表明QNs确实对幼龄动物负重关节软骨有损伤作用，其损伤程度与动物的年龄和药物浓度有关，年龄越小药物浓度越大，关节软骨损伤越严重[1，2]。并且在同等浓度下，环丙沙星对犬软骨细胞生长抑制率随培养时间的延长而增高[3]。

通过本实验证实0.05、0.10、0.15g/L浓度的环丙沙星对体外培养的犬软骨细胞具有抑制生长的作用，抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。随着时间延长，抑制作用增强；随着剂量增加，抑制作用增强。

[1] 曲芬，姜素椿，王力娜，等.环丙沙星对胎儿软骨发育的影响[J].中华内科杂志，1998，37（4）：239.

[2] Stahlmann R，ZippelU，Forster C，et al.Chondrotoxicity and toxicokinetics of sparfloxacin in juvenile rats[J].Antimicrob Agents Chemother，1998，42（6）：1470.

[3] 刘健，魏莉，王永秀，等.喹诺酮类药物不良反应回顾性分析[J].医学理论与实践，2007，20（5）：561-562.