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(1. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530004; 2. 中国科学院水生生物研究所,淡水生态与生物技术国家重点实验室, 武汉 430072)

斜带石斑鱼MyD88基因的原核表达及蛋白纯化

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(1. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530004; 2. 中国科学院水生生物研究所,淡水生态与生物技术国家重点实验室, 武汉 430072)

Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)是一类重要的模式识别受体, 其胞外结构域可识别特定的病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns, PAMPs), 胞内的 TIR (Toll-like/IL-1 receptor)结构域则参与启动胞内信号转导, 诱导细胞产生活性氧中间体(Reactive oxygen intermediate)、活性氮中间体(Reactive nitrogen intermediate)和促炎症因子, 在感染早期发挥重要作用[1]。在哺乳动物中, 髓样分化因子 88(Myeloid differentiation factor 88, MyD88)是TLR信号通路的关键接头分子, 其C端TIR域与TLR的TIR相互结合后, 通过募集IL-1受体相关激酶(Interleukin-1 receptor-associated kinase, IRAK)IRAK4、IRAK1和IRAK2, 激活NF-κB和MAPK, 进而诱导IL-1、TNF和IFN等细胞因子表达[2—4]。

迄今为止, 有关鱼类MyD88分子的报道主要涉及基因克隆和表达调节研究。已有的研究显示, 人工感染迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的牙鲆(Paralichthys olivaceus), 其头肾和脾脏中MyD88表达阳性细胞显著增多[5]; 用灭活的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)刺激大黄鱼(Pseudosciaena crocea), 其免疫器官 MyD88的表达水平显著上调[6], 灭活的鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis), 也得到类似结果[7];应用PolyI∶C和鞭毛蛋白刺激虹鳟(Oncorhynchus mykiss)头肾细胞, MyD88表达上调[8]。Skjaeveland, et al.的研究显示, 用 CpG ODN 处理转染大西洋鲑(Salmo salar) MyD88基因的哺乳动物细胞, 可激活 NF-κB表达[9]。此前, 我们已克隆到斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的TLR1、TLR2及MyD88基因, 分析了它们的表达模式及其表达调节[10,11]。本研究旨在原核表达并纯化斜带石斑鱼MyD88重组蛋白, 为研究和解析斜带石斑鱼MyD88生物学功能与鱼类TLR信号转导通路奠定基础。……