韦竑宇 梁 立

中日友好医院脊柱外科，北京 100029

他莫昔芬作为乳腺癌患者内分泌治疗药物在临床已被广泛应用。 近年来研究发现，他莫昔芬在缺血缺氧性脑损伤、脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）、脑出血等疾病中可发挥神经保护作用[1-3]。但他莫昔芬在SCI 中发挥神经保护作用的机制仍是未解之谜。

本研究旨在通过检测核因子kappa B p65 （NFκB p65）及磷酸化核因子κB 抑制因子α（pI-κB α）表达，观察他莫昔芬对核因子-kappa B 抑制蛋白激酶复合体/核因子kappa B（IKK/NF-κB）通路的调控；通过检测活性半胱天冬酶-3（caspase-3）活化水平，观察其对细胞凋亡的影响； 通过检测髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性，观察其对炎症细胞浸润的影响，从而探讨其神经保护机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

健康雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠51 只（由中日友好医院实验动物中心提供），鼠龄10～12 周，体重200～220 g，随机分为3 组：假手术组（n=17，仅行椎板切除术）； 对照组 （n=17，SCI+硬膜下注射二甲基亚砜）；他莫昔芬组（n=17，SCI+硬膜下注射他莫昔芬）。

1.2 模型制备及给药

3 组大鼠麻醉后，假手术组仅行T11～T13段椎板切除。其余两组以T12棘突为中心，咬除椎板，暴露脊髓，用质量为20 g 的不锈钢棒从12.5 mm 高处垂直落下（打击量25 g·cm），诱发脊髓损伤。

SCI 后30 min，对照组硬膜下注射2%二甲基亚砜5 mL/kg； 他莫昔芬组损伤部位硬膜下注射他莫昔芬5 mg/kg（溶于2%二甲基亚砜1 mg/mL）。

术后24 h，3 组大鼠以10%水合氯醛（600 mg/kg）麻醉后， 以含有1 U/mL 肝素的生理盐水进行心脏灌洗，截取10 mm 损伤节段脊髓，置于-80℃冰箱保存备用。

1.3 免疫印迹法检测NF-κB p65、pI-κB α 和活性caspase-3

蛋白提取按照蛋白抽提试剂盒说明书进行（普利莱基因有限公司， 北京），BCA 法蛋白定量检测浓度（普利莱基因有限公司，北京），计算蛋白电泳加样量。……