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阿维A对系统性硬皮病成纤维细胞胶原合成及I型前胶原mRNA表达的影响

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目的: 明确阿维A对系统性硬皮病成纤维细胞胶原合成及I型前胶原mRNA表达的影响。方法: 原代培养系统性硬皮病(SSc)患者皮肤成纤维细胞(FB)，使用不同浓度的阿维A(10－5、10－6、10－7、10－8mol/L)作用48 h，用羟脯氨酸法测定胶原的质量浓度，RT－PCR法I型前胶原mRNA的表达。结果: 阿维A实验组FB胶原合成及I型前胶原mRNA的表达较对照组减少，且均与阿维A呈浓度依赖性关系。结论: 阿维A可能通过抑制FB I型前胶原基因的表达减少胶原合成。

系统性硬皮病； 阿维A； 成纤维细胞

系统性硬皮病(SSc)是以过量胶原在皮肤、肺、消化道等内脏器官沉积为特征的结缔组织疾病，引起皮肤和内脏器官纤维化。成纤维细胞(FB)是参与SSc纤维化、硬化的主要细胞。阿维A属第二代单芳香维A酸，有个案报道其治疗SSc有效。本文通过体外试验观察阿维A对SSc患者皮肤成纤维细胞胶原分泌和I型前胶原mRNA表达的影响，探讨其治疗SSc可能的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 DMEM培养基(Gibco)；胶原酶(Calbiochem)；阿维A(重庆华邦公司)；羟脯氨酸检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)；Biospin RNA Simply P提取试剂盒(BioFlux)；逆转录试剂盒(BioFlux)；I型前胶原特异性引物(上海生工)；小牛血清(杭州四季青公司)。

1.2 方法

1.2.1 FB的来源及培养 采用原代分散细胞培养法。13例SSc患者(符合美国风湿病学会1980年分类标准)，男1例，女2例，病程分别为9个月、1年、2年，Rodnan评分2分别为12、15、26。局麻下切取3例SSc患者前臂外侧活动性硬化皮损边缘皮肤组织，置胶原酶溶液中，37℃消化4 h，分离表、真皮。……