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重组大肠杆菌表达水稻白叶枯病菌FtsZ蛋白

2014-03-21陈洋黄运红李素珍龙中儿

生物技术通报 2014年11期
关键词:水稻

陈洋 黄运红 李素珍 龙中儿

(江西师范大学生命科学学院,南昌 330022)

重组大肠杆菌表达水稻白叶枯病菌FtsZ蛋白

陈洋 黄运红 李素珍 龙中儿

(江西师范大学生命科学学院,南昌 330022)

旨在通过现代分子生物学技术制备水稻白叶枯病菌FtsZ蛋白。以水稻白叶枯病菌总DNA为模板,采用巢式PCR方法扩增获得水稻白叶枯病菌ftsZ基因,构建ftsZ基因的表达载体pET-22b-ftsZ,转化表达宿主E. coli BL21后,经PCR、Nde I/ Xho I双酶切及测序鉴定、阳性克隆子经IPTG诱导表达,融合蛋白经镍柱纯化后,通过SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。结果显示,水稻白叶枯病菌ftsZ基因的重组表达载体构建成功,且阳性克隆子在IPTG的诱导下表达了FtsZ-6×His融合蛋白,并通过镍柱纯化获得了电泳纯的FtsZ-6×His融合蛋白。

FtsZ蛋白 水稻白叶枯病菌 大肠杆菌 基因重组

FtsZ蛋白是真核细胞微管蛋白的原核同系物,在细菌体内高度保守,具有GTPase活性,并能受GTP的诱导发生聚合,是原核生物细胞分裂的关键蛋白之一[1]。由于在细胞分裂中的重要作用及其高度的保守性,FtsZ是抗菌药物开发的理想靶标之一[2]。水稻白叶枯病是水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae)引起的水稻生产上的严重病害之一,导致水稻叶片枯萎,光合作用受到妨碍,稻穗充实率降低,不实粒增加,同时可造成米质疏松脆裂,食味降低[3,4]。目前,常用手段是使用噻枯唑作为防治水稻白叶枯病的主要化学药剂,但水稻白叶枯病菌对噻枯唑的敏感性逐渐下降,抗药突变体已出现[5,6]。因此,研发经济、高效、无毒的抗水稻白叶枯病菌的农用抗生素具有重要的意义。……

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