王巍杰，张 杰

(1.河北联合大学生命科学学院，河北唐山063009;2.河北联合大学化学工程学院，河北唐山063000)

漆酶(Laccase，E.C.1.10.3.2)是一种含铜多功能多酚氧化酶，属于蓝色氧化酶家族［1］，漆酶能够催化O－和P－联苯酚、多酚、芳香胺、苯硫醇和酚类染料等的氧化反应，在纸浆生物漂白、废水处理、苯氧基类除草剂去毒等领域得到了广泛的研究和应用［2］。产漆酶菌株在自然界中分布广泛，但自然条件下能够有效分解木质素且产酶率较高的菌株不多，远远无法满足工业生产对漆酶的需要。漆酶最早从漆树中发现，一些高等真菌和细菌也能分泌漆酶，目前研究和应用最广泛的是担子菌、子囊菌等微生物，尤其是担子菌中的白腐真菌［3］。本文研究从腐木中筛选产漆酶较高的菌株，探索葵花粉发酵产漆酶的优化条件。

1 材料与方法

1.1 材料

样品:来源于河北省唐山市南湖公园潮湿土壤的腐朽木材。

葵花粉:向日葵花盘采摘自河北唐山周边地区，冲洗、晒干、粉碎、过筛。

1.2 培养基

1.2.1 愈创木酚PDA固体培养基:土豆浸液1000 mL，葡萄糖20 g，KH2PO43.0 g，MgSO41.5 g，酵母浸膏0.5 g，琼脂18 g，愈创木酚0.4 mL，pH自然，于121℃灭菌20 min。

1.2.2 液体种子培养基:葡萄糖10 g，酵母浸膏0.5 g，CuSO4·5H2O 4 mg，营养盐浓缩液100 mL，微量元素浓缩液1 mL，pH5.8醋酸缓冲溶液50 mL，定容至1000 mL，于121℃灭菌20 min;

营养盐浓缩液:MgSO4·7H2O 0.2g，KH2PO420g，(NH4)2SO414g，CaCl2·2H2O 4g，H2O 1000 mL。

微量元素浓缩液:FeSO4·7H2O 5g，MnSO4·7H2O 1.6g，CoCl2·6H2O 3.7g，ZnSO4·7H2O 1.4g，H2O 1000 mL。

1.2.3 产酶培养基:葵花粉50.00 g，KH2PO43.0 g，MgSO41.5 g，CaCl40.1 g，酵母浸膏0.5 g，微量元素浓缩液1 mL，pH5.8醋酸缓冲溶液100 mL，定容至1000 mL，分装后于121℃灭菌20 min。

1.3 方法

1.3.1 初筛

将腐朽木材粉碎成直径2 mm的小块，用无菌蒸馏水反复漂洗2～3次，每次约1 min，然后用少量医用乙醇进行短时间漂洗消毒，最后用无菌蒸馏水洗掉乙醇。……