黄 敏，陈明迎，舒建德

（连州卫生学校，广东 连州 513400）

1 材料

1.1 器材

培养皿一套、表面皿（或酒精瓶内盖）、中速色谱滤纸、毛细吸管、显色用喷雾器、电吹风、电烤箱。

1.2 试剂

0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（50ml）：精密称取1.42 g磷酸氢二钠固体，用蒸馏水溶于小烧杯中，再转移到50ml容量瓶中定容。

0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（50 ml）：精密称取1.2 g磷酸二氢钠固体，用蒸馏水溶于小烧杯中，再转移到50ml容量瓶中定容。

pH 7.4的磷酸缓冲溶液：取0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液40.5m l与0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液9.5 m l混匀，加蒸馏水至1 000m l。

0.1mol/L丙氨酸溶液：精密称取0.891 g丙氨酸固体，溶于少量pH7.4的磷酸缓冲溶液中，以1 mol NaOH调至pH7.4后，加磷酸缓冲溶液至100m l。

0.1mol/L谷氨酸溶液：精密称取0.735 g谷氨酸固体，溶于少量pH7.4的磷酸缓冲溶液中，以1 mol NaOH调至pH7.4后，加磷酸缓冲溶液至50ml。

混合氨基酸溶液：取丙氨酸与谷氨酸溶液各5m l混合。

0.1%茚三酮乙醇溶液：精密称取0.1 g茚三酮固体，用少量95%乙醇溶解，加95%乙醇至100m l。

饱和苯酚-水溶液（展开剂）：将适量的苯酚溶液溶于适量的水中，得到浑浊液，置于分液漏斗中，静置8小时，待下层溶液清晰透明，取下层溶液。

2 方法

2.1 准备

取一张边长为11 cm的正方形中速色谱滤纸，在滤纸上画一直径为5.5 cm的圆，以该圆的圆心为定点，1 cm为半径再画一同心圆，在小圆内过圆心作两条相互垂直的线，两条垂线两端分别与小圆连接，见图1。

2.2 点样

如图1所示，在1、3两处用毛细吸管分别点上丙氨酸和谷氨酸溶液各3滴，在2、4两处点上混合氨基酸溶液，注意点样痕迹不宜扩散较宽。每一次点完用电吹风吹干，重复点3次即可。

图1 纸色谱实验的层析滤纸准备