李晰，辛世杰，王磊，宋泽，荆玉辰，曹辉，段志泉，张健

（中国医科大学附属第一医院普外教研室血管甲状腺外科，沈阳110001）

·技术方法·

氯化钴模拟法构建骨骼肌细胞缺氧模型

李晰，辛世杰，王磊，宋泽，荆玉辰，曹辉，段志泉，张健

（中国医科大学附属第一医院普外教研室血管甲状腺外科，沈阳110001）

目的观察CoCl2对体外培养的原代骨骼肌细胞的影响，探讨合理的体外化学模拟低氧模式。方法利用组织贴块法培养并鉴定原代骨骼肌细胞，给予CoCl2处理，观察不同时间和浓度细胞凋亡情况，以及通过免疫印迹及实时定量聚合酶链反应检测低氧诱导因子1α（HIF-1α）、BAX的表达变化情况。结果与对照组比较，CoCl2处理组的细胞存活率明显下降（P＜0.05），凋亡率明显增加（P＜0.05），且骨骼肌细胞存活率下降程度及细胞凋亡率增加程度均随着氯化钴浓度增加时间延长而升高。HIF-1α、BAX蛋白水平亦随CoCl2浓度升高和时间延长而增加。结论CoCl2对原代骨骼肌细胞的增殖凋亡及相关基因的表达成呈时间和浓度依赖性，成功建立起一种体外培养原代骨骼肌细胞缺氧诱导模型，可以作为体外研究骨骼肌缺血缺氧的良好模型。

氯化钴；骨骼肌细胞；凋亡；低氧诱导因子1α

下肢动脉闭塞症是常见的下肢动脉闭塞性疾病，由于下肢缺血时动脉血流减少、组织因缺血等发生不可逆性损伤。细胞坏死、萎缩和间质纤维化等导致骨骼肌损伤。目前对这种肌肉缺血性变化尚无良好的治疗方法。缺血与缺氧常常是相互伴随的，各种研究表明显示，在哺乳系统中，二氯化钴是已经被广泛应用的模拟缺氧环境的化学试剂，能够产生与缺氧缺血相似的反应［1］。……