王发选，许红霞，张洋，杨婷，黄程君，任晓慧，兰亚佳，张勤

(1.宁夏医科大学公共卫生学院劳动卫生教研室，宁夏 银川 750004；2.四川大学华西公共卫生学院劳动卫生教研室，四川 成都 610041；3.上海市浦东区疾病预防控制中心，上海 200136)

迄今为止，矽肺的发病机制尚不完全清楚，多年的研究发现肺泡巨噬细胞与SiO2相互作用而产生的诸多因子在矽肺发生发展过程中起到关键性作用[1]。肺泡巨噬细胞(AM)是生物体抵御外来微生物入侵的天然屏障，是机体固有性免疫系统中重要的效应细胞。AM位于肺泡腔及微小气道内，是肺组织内重要的常驻细胞和防御细胞。除发挥吞噬防御功能外，还可通过分泌大量的细胞因子启动和调节局部的免疫炎症性反应。在矽肺发病机制的各种学说中，巨噬细胞受损是其中重要机制[2]。本研究采用大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383细胞为研究对象，通过不同剂量粉尘刺激细胞，分析炎症因子的表达情况，为后续矽肺发病机制的体外研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 细胞株

NR8383大鼠肺泡巨噬细胞株，购于中国科学院上海细胞所。

1.2 主要试剂及仪器

标准石英粉尘(SiO2纯度99%，粒子大小范围在0.5～10 μm，80%的粒子直径在1～5 μm之间，Sigma 公司，美国)、MTT(Sigma 公司，美国)、RNA store液、琼脂糖、DNA Ladder、6×Loading Buffer、Green view(天根生化，中国)、TRIZOL试剂(Life science，美国)、异丙醇、氯仿(成都科华试剂，中国)，反转录试剂盒，Realtime qPCR试剂盒、RNase-free水(Takara公司，日本)、qPCR 引物(上海生工生物工程公司)。

SW-CJ-2FD型双人单面超净工作台(苏州净化，中国)，-80 ℃冰箱、纯水仪(Millipore 公司，美国)，高速低温离心机(Thermo Fisher公司，美国)，凝胶成像分析系统、普通PCR仪、实时荧光定量PCR仪CFX96(Bio-rad公司，美国)，紫外分光光度仪(岛津公司，日本)，电泳仪、电泳槽(北京六一，中国)。……