董昕欣，刘 伟，邴国霞，张劭俣，李文京，王传彬，原 霖，韩 雪，张 硕，李雁冰，郭建宏

（1.中国动物疫病预防控制中心，北京 朝阳100125；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江 哈尔滨150001；3.中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃 兰州730046）

兽医系统实验室是指隶属于各级兽医主管部门，承担动物疫病检测、诊断和监测等任务的兽医实验室。按照《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》[1]，兽医系统实验室作为动物疫病预防控制机构的组成部分，主要承担动物疫病诊断和检测、动物疫情和免疫状况监测、动物疫病防控科学研究等工作，对动物疫病防控发挥着重要支撑作用。开展兽医实验室检测能力比对，是评价兽医实验室检测技术水平的重要手段，也是加强兽医实验室质量控制的有效方法[2]。为提高全国各省级兽医实验室的检测能力和技术水平，按农业部要求，中国动物疫病预防控制中心组织实施了2014年省级兽医系统实验室能力比对，全国32个省级兽医实验室全部参加，在规定时间内完成了比对样品制备、分发、检测和结果回收。比对结果客观反映了实验室的检测能力和技术水平，对该结果进行分析讨论有利于进一步做好兽医系统实验室管理工作。报告如下。

1 比对计划

本次比对依据农业部办公厅和中国动物疫病预防控制中心有关2014年兽医系统实验室检测能力比对的文件[3-4]要求，共设置4个比对项目，分别是H7N9亚型禽流感抗体（H7N9-AIAb）检测、口蹄疫病毒（FMDV）检测、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）检测、禽白血病病毒（ALV）检测。全国共有32个省级兽医实验室（含新疆生产建设兵团）参加此次比对。

2 比对方法

2.1 试验方法与标准 针对4个检测能力比对项目，采用国家参考实验室或专业实验室推荐的方法和试剂，其中部分试剂由参加比对的省级实验室自行准备，见表1。

表1 比对试验的方法、标准和主要试剂

2.2 比对样品制备

2.2.1 制备方式 各国家参考实验室和专业实验室分别完成相应样品的制备、标定、分装和编号，并将样品和标定值送交中国动物疫病预防控制中心统一保存，作为盲样下发使用。

2.2.2 H7N9-AIAb样品 鸡血清抗体样品5份，由参考值分别为＜1、4、7的3组样品中各抽取1～2份样品组成。

2.2.3 FMDV样品 口蹄疫病毒样品5份，参考值分别为阴性、O型阳性、O型阳性、A型阳性、A型阳性。

2.2.4 PRRSV样品 猪繁殖与呼吸综合征病毒样品5份，参考值分别为阴性、弱阳性、弱阳性、强阳性、强阳性。

2.2.5 ALV样品 禽白血病病毒样品5份，由参考值分别为阴性、弱阳性、强阳性3组样品中各抽取1-2份样品组成。

2.3 比对样品传递 比对样品为具有生物学活性的血清、尿囊液或细胞培养物，为保持其良好的生物学活性，样品存放在-20℃以下冰柜中。分发时将样品和试剂放入装有冰袋的保温箱中保存，由参加比对的省级实验室派专人在规定的时间内统一领取，并在12 h之内送达参加比对的实验室。

2.4 评判标准

2.4.1 H7N9-AI检测评判标准 检测值与参考值的偏差不超过1个滴度，判为结果准确。

2.4.2 FMDV检测评判标准 O型阳性和A型阳性样品的检测结果应为“阳性”；阴性样品的检测结果应为“阴性”。

2.4.3 PRRSV检测评判标准 强阳性和弱阳性样品的检测结果应为“阳性”；阴性样品的检测结果应为“阴性”。

2.4.4 ALV检测评判标准 强阳性和弱阳性样品的检测结果应为“阳性”；阴性样品的检测结果应为“阴性”。

3 比对结果

3.1 总体结果 根据比对结果评判标准，在32个参加省级实验室中，有29个实验室对所有项目的检测结果全部准确，有3个实验室部分比对项目检测值存在较大偏差。出现较大偏差的主要是H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验检测项目，见表2。

表2 32个实验室比对结果统计

3.2 H7N9-AIAb检测比对结果 30个实验室的检测结果全部正确，说明大多数实验室在血凝抑制技术方面较为成熟。1个实验室（第23号）对参考值4log2样品的检测结果出现错误，高于参考值两个滴度。1个实验室（第28号）对参考值4log2样品的检测结果出现错误，低于参考值两个滴度。

对于参考值相同的双份重复样品的检测，大部分实验室（30/32）检测结果自身重复性较好，说明绝大部分实验室的随机误差较小；而第23号、第25号2个实验室对于参考值相同的两份样品检测值不一致，反映出这些实验室在质控体系方面存在问题。结果见图1。

3.3 FMDV检测比对结果 32个实验室对FMDV弱强阳性和阴性样品的检测结果全部正确，见表3。

图1 各实验室H7N9-AI检测值离散

表3 各实验室FMDV检测结果频次与参考值对照

3.4 PRRSV检测比对结果 31个实验室对PRRSV弱强阳性和阴性样品的检测结果全部正确，1个实验室1份弱阳性样品检测结果为阴性。见表4。

表4 各实验室PRRSV检测结果频次与参考值对照

3.5 ALV检测比对结果 32个实验室对ALV弱强阳性和阴性样品的检测结果全部正确，见表5。

表5 各实验室ALV检测结果频次与参考值对照

4 讨论

从比对结果来看，在参加比对的32个省级兽医实验室中，有29个实验室对所有项目的检测结果全部准确，有3个实验室部分比对项目检测值存在较大偏差，说明大部分省级兽医实验室具备相应的检测能力和技术水平。出现较大偏差的主要是H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验检测项目，说明定量或半定量的血清学检测项目，其难度和要求大于定性的分子生物学检测项目；也说明这部分实验室在半定量的检测技术方面还不够稳定。

本次实验室检测能力比对中设置了平行样品，用以评估实验室检测体系的稳定性。结果显示，大部分实验室的检测结果平行性好，仅少数实验室对参考值相同的两份样品的检测值不一致。这说明部分实验室在检测中存在较多的随机误差，应当更加明确各个操作环节的细节要求，减少随意性操作，增加实验室检测结果的稳定性。

血清学检测和病原学检测是兽医系统实验室的基础检测方法，本次比对的试验项目包含了血凝抑制试验、ELISA、PCR、荧光定量PCR等多种常用方法；检测的疫病类别也涵盖了当前重点防控的几个重大动物疫病，因此比对结果能客观地反映实验室的检测能力和技术水平。我国以前在兽医领域开展实验室检测能力比对相对较少，出入境检疫系统曾开展过禽流感AGID抗体的定性检测及H5、H9亚型HI抗体定量检测的比对[7]，部分动物疫控实验室参加过国际间或地方实验室自发组织的比对，而本次比对是全国范围的省级兽医系统实验室之间的比对，对于即将全面开展的全国各市、县级兽医系统实验室比对具有一定的借鉴意义。

[1]国务院办公厅.国务院办公厅关于印发国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）的通知[Z].国办发[2012]31号.北京：国务院办公厅，2012-05-20.

[2]王文，张继红，兰玲，等.2010年新疆兽医系统实验室检测能力比对试验的探讨与建议[J].中国动物检疫，2011，28（9）：19-21.

[3]农业部办公厅.农业部办公厅关于开展2014年兽医系统实验室检测能力比对工作的通知[Z].农办医[2014]13号.北京：农业部办公厅，2014-03-28.

[4]中国动物疫病预防控制中心.关于印发《2014年省级兽医系统实验室检测能力比对实施方案》的通知[Z].疫控（安）[2014]48号.北京：中国动物疫病预防控制中心，2014-04-03.

[5][农业部.农业部关于印发《兽医系统实验室考核管理办法》的通知[Z].农医发[2009]15号.北京：农业部，2009-08-11.

[6]李掌林.雏议实验室间的比对试验工作[J].现代测量与实验室管理，2004（2）：36-39.

[7]刘来福，张鹤晓，张利峰，等.家禽禽流感病毒AGID抗体定性检测及H5、H9亚型HI抗体定量检测能力验证结果分析[J].现代测量与实验室管理，2004（2）：29-32