刘 峰

（日照市药品检验所，山东日照276800）

HPLC法测定天麻眩晕宁合剂中天麻素和芍药苷的含量

刘 峰

（日照市药品检验所，山东日照276800）

目的建立高效液相色谱法测定天麻眩晕宁合剂中天麻素和芍药苷的含量。方法色谱柱为ODSC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相为乙腈－0.1%磷酸溶液，检测波长为223 nm，柱温为30℃，流速为1 mL· min－1。结果天麻素和芍药苷的线性范围分别是0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg，平均加样回收率分别为为98.3%，96.7%。结论该方法简便、准确、重复性好，可用于天麻素眩晕宁合剂中天麻素和芍药苷的定量测定。

天麻眩晕宁合剂；天麻素；芍药苷；高效液相色谱法；含量测定

天麻眩晕宁合剂属于国家中药保护品种，具有祛痰定眩、和胃止呕的功效；临床用于眩晕、恶心、呕吐、舌淡、苔白滑等症，尤适用于美尼尔氏综合征。由天麻、白芍、半夏、甘草等十二味中药组方而成。天麻、白芍为天麻眩晕宁合剂的主药之一，天麻临床上用于头痛眩晕，肢体麻木，小儿惊风，癫痫，抽搐，破伤风等；白芍具有平抑肝阳，养血收阴之功效。本实验参考文献［1～4］采用HPLC法同时测定天麻素和芍药苷，为控制天麻眩晕宁合剂的质量提供可靠、准确快速的方法。

1 仪器与试药

LC－20ATVP高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Agilent1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；XS105DU电子天平（瑞士，梅特勒－托利多）；Millipore超纯水仪（美国Millipore公司）。天麻素对照品，芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110807－200205，110736－200527）；乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为分析纯；天麻眩晕宁合剂购自日照真诚大药房有限公司天津路药店（陕西中医学院制药厂，批号：130624、130702、130711、130729）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：ODSC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相A为乙腈，B为0.1%磷酸溶液；检测波长：223 nm；柱温：30℃；流速：1 mL·min－1；进样量：20μL；天麻素、芍药苷的保留时间分别为：8.25、12.568 min。流动相梯度洗脱条件见表1，色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥后的天麻素对照品10.20 mg、芍药苷对照品36.5 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇超声（300W，40 kHz）20 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

表1 流动相梯度洗脱顺序

图1 HPLC色谱图

2.3 供试品溶液的制备 取本品，摇匀，精密量取5 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇超声（300 W，40 kHz）20 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 空白试验 按天麻眩晕宁合剂制备方法制成缺天麻、白芍的阴性对照品，再按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液，并按上述色谱条件进行检测。结果在天麻素、芍药苷对照品相同保留时间处无干扰峰出现，表明处方中其他药味对天麻素、芍药苷的测定无干扰。

2.5 线性关系考察 精密吸取“2.2”项下溶液，0.5、1、2.5、5、10、20 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，连同天麻素、芍药苷对照品溶液一并进样20μL进行测定。以峰面积（Y）对进样量（X）进行线性回归，得回归方程为：天麻素Y＝1 152X－124.32，r＝0.999 6；芍药苷Y＝15 921.1X－654.2，r＝0.999 2

线性范围：天麻素、芍药苷分别为0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg，表明线性关系良好。

2.6 稳定性试验 取样品按“2.3”项下方法制成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别在0、5、10、15、20、25 h测定，结果显示，在25 h内测定供试品溶液中天麻素、芍药苷峰面积的RSD为0.85%，0.79%，表明该方法稳定性良好。

2.7 重复性试验 精密量取同一批号的样品6份（每份3 mL），按“2.3”项下方法制备溶液并进行测定。结果天麻素的平均值为0.433 8 mg·mL－1，RSD为0.92%，芍药苷的平均值为1.462 0 mg·mL－1，RSD为0.95%。

2.8 精密度试验 取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次测定，计算天麻素、芍药苷峰面积的RSD为0.62%、0.38%。

2.9 加样回收率试验 采用加样回收法，精密量取已知含量的样品6份（批号为130624，测得天麻素、芍药苷含量为0.433 8 mg·mL－1和1.462 mg·mL－1）各5 mL，分别准确加入天麻素对照品溶液0.157 mg ·mL－1、芍药苷对照品溶液0.574 5 mg·mL－1各10 mL，按“2.3”项下方法制成供试品溶液，按“2.1”项下方法进行测定，用外标法计算含量及加样回收率，天麻素、芍药苷的平均回收率（n＝6）为98.3%，RSD为0.46%和96.7%，RSD为0.73%，结果见表2、3。

表2 天麻素回收率试验

表3 芍药苷回收率试验

2.10 样品测定 取4个批号天麻眩晕宁合剂，按“2.3”项下方法制成供试品溶液并按上述色谱条件测定峰面积，按外标法计算样品的含量，结果见表4。

表4 样品测定结果（n＝4）

2.11 耐用性试验 试验考察了不同仪器和色谱柱对样品含量的影响，采用3根不同品牌的色谱柱Hypersil C18柱，Shimadzu VP－ODSC18柱，Agilent HC－C18柱，规格均为4.6 mm×250 mm，5μm，分别在2台不同的仪器上，按照上述色谱条件进行试验，结果见表5。

表5 不同仪器和色谱柱测得的样品含量

3 讨论

3.1 质量标准的提高 天麻眩晕宁合剂是一种治疗美尼尔氏症有效的中成药，原标准仅对钩藤，陈皮进行了定性鉴别，文献［2］报道中对天麻进行了含量测定，其他药材未进行控制，容易给不法分子偷工减料，制造假劣药品带来可乘之机，本方法可以对其中含有的有效成分天麻、白芍进行定性鉴别和定量含量测定。

3.2 检测波长的选择 HPLC法测定天麻素、芍药苷的含量，需选择适当的检测波长。笔者通过试验，取“2.2”项下天麻素对照品、芍药苷对照品溶液，采用双光束分光光度法在200～350 nm处扫描，天麻素对照品在221 nm处有最大吸收，芍药苷对照品在230 nm波长有最大吸收，本试验选取223 nm作为检测波长取得满意效果。

3.3 流动相的选择 在选用流动相时，参考文献［3～6］报道分别使用甲醇－0.02 mol·L－1磷酸二氢钾溶液（28∶72）、甲醇－水－冰醋酸（23∶75∶2）等进行试验，分离效果都不理想，改用以乙腈－0.1%磷酸溶液作梯度洗脱，分离度达到了2.0，可以用来测定。

［1］赵成.HPLC法测定天麻眩晕宁合剂中天麻素的含量［J］.安徽医药，2008，12（1）：23－24.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：54－55.

［3］桂双英，朱友，徐衡.妇康宝口服液的质量标准研究［J］.安徽中医学院学报，2004，23（3）：47－49

［4］吴基威，朱锐金.高效液相色谱法测定茴桂妇炎胶囊中芍药苷的含量［J］.中国中医药信息杂志，2010，17（11）：43.

［5］唐富丽，秦郁文.HPLC法测定逍遥合剂中芍药苷的含量［J］.齐鲁药事，2011，30（4）：202－203

［6］赵辉，武晓红，蒲晓辉.HPLC法同时测定天舒胶囊中阿魏酸和天麻素［J］.中成药，2014，36（1）：111－114.

Determ ination of gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning M ixture by HPLC

LIU Feng
（Rizhao Institute for Drug Control，Rizhao 276800，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning Mixture.MethodsThe optimum HPLC condition was as follows：Hypersil C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm），mobile phase：actonitrile－0.1%phosphoric acid solution，detection wavelength：223 nm，column temperature：30℃，flow rate：1 mLmin－1.ResultsTherewere good linearity between peak areas and injection quantity of gastrodin and paeoniflorin within the range of0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg.The average recoverywas98.3%for gastrodin，96.7% for paeoniflorin.ConclusionThe HPLCmeasurementwas reasonable，stable and accurate.Themethod could detect gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning Mixture.

Tianma Xuanyunning Mixture；Gastrodin；Paeoniflorin；HPLC；Determination

R927.2

：A

2095－5375（2014）07－0386－003

刘峰，男，副主任医师，研究方向：药品检验，E－mail：liufeng7663＠163.com。