吕春荣，李卫娟，权国波，洪琼花

（云南省畜牧兽医科学院，昆明 650224）

云南半细毛羊毛囊干细胞微生物污染检测

吕春荣，李卫娟，权国波，洪琼花

（云南省畜牧兽医科学院，昆明 650224）

为检测云南半细毛羊毛囊干细胞（hair follicle stem cells，HFSCs）是否受到微生物污染，为后续的诱导分化等研究奠定基础。用培养法检测细菌、真菌污染；利用荧光染色剂Hoechst33342检测支原体污染。结果表明：实验组细胞和阴性对照中均没有发现细菌污染，实验组中有25%的细胞受到霉菌污染；实验组细胞经Hoechst33342荧光染色后，仅细胞核显色，细胞表面及细胞周围干净、清晰，无荧光小点。说明云南半细毛羊HFSCs没有细菌、支原体污染，仅有25%细胞受到霉菌污染。霉菌孢子对环境的耐受力很强，普通的消毒液很难清除，所以对操作环境带来严重危害。

云南半细毛羊；HFSCs；污染

污染是细胞培养过程中长期面临的问题。物理、化学及生物因素都可能侵入培养环境对细胞造成污染。造成动物细胞培养体系污染的主要微生物是细菌、真菌、支原体等。入侵的微生物在培养体系中不断增殖、代谢。微生物代谢消耗大量必需的养分，同时产生多种有毒的代谢产物，进一步对细胞产生毒害作用［1］。

培养细胞作为一个生物体，会对培养环境以及环境中的污染物做出相应的反应，造成培养细胞生物学特性改变，而对实验结果造成潜在威胁，并随着污染时间的延长而增加，使研究结果的真实性和可靠性大大下降。American Type Culture Collection（ATCC）和日本理化研究所制订了标准化细胞系的细胞库细胞培养物的支原体污染的检测条例。……