仇加高

（高邮市人民医院病理科，江苏225600）

p40、天门冬氨酸蛋白酶、甲状腺转录因子-1在肺鳞癌与腺癌表达敏感性和特异性

仇加高

（高邮市人民医院病理科，江苏225600）

目的：探讨肺非小细胞癌组织中鉴别鳞癌和腺癌有意义的免疫组化检测标记。方法：采用免疫组织化学SP法检测非小细胞肺癌51例组织中p63、p40、CK5/6、甲状腺转录因子-1（TTF-1）、CK7、天门冬氨酸蛋白酶（Napsin-A）的表达。结果：（1）p40、p63、CK5/6在非小细胞肺癌中表达：非小细胞肺癌51例中，p40、p63、CK5/6在鳞状细胞癌20例中阳性表达为20例（100.0%），19例（95.0%)，18例（90.0%），在腺癌31例组织中阳性表达为0例（0.0%）、6例（19.4%）、3例（9.7%)。p40在31例腺癌中无1例表达，特异性高于p63、CK5/6(χ2=6.424，P＜0.05)，而p63、CK5/6两组间特异性比较差异无统计学意义。（2）TTF-1、CK7、Napsin-A在非小细胞肺癌中表达：非小细胞肺癌51例中，TTF-1、CK7、Napsin-A在肺腺癌31例中阳性为27例（87.1%）、25例（80.6%）、28例（90.3%），在鳞状细胞癌20例组织中阳性表达分别为1例（5.0%）、7例（35.0%）、0例（0.0%），TTF-1和Napsin-A阳性表达特异性高于CK7(χ2=12.197，P＜0.01)。结论：p40、NapsinA、TTF-1联合检测可更好地鉴别诊断肺非小细胞癌，为临床进行靶向治疗提供依据。

肺非小细胞癌；免疫组织化学SP法；p40；天门冬氨酸蛋白酶；甲状腺转录因子-1

1 材料和方法

1.1 材料 非小细胞肺癌51例中，男33例，女18例，年龄45～73岁，中位年龄60岁。p40、p63、CK5/6、TTF-1、CK7、Napsin-A试剂及二抗、DAB显色剂（均福州迈新公司）。

1.2 方法 （1）免疫组化SP法染色：所有手术切除的肺肿瘤标本均经4%中性甲醛液固定24小时。常规取材，脱水、透明，石蜡包埋，4μm厚连续切片。采用免疫组织化学方法SP法进行染色，用已知阳性片作对照。染色结果经2位有经验的病理医师在光镜下进行判定；并将非小细胞肺癌51例HE切片重新调出复看、诊断。（2）结果判断：p40、p63、TTF-1示细胞核黄或棕色染色为阳性,CK5/6、CK7、Napsin-A示细胞质黄或棕色染色为阳性（图1～6）。染色细胞数<10%为阴性(-)，染色细胞数≥10%为阳性(+)。

1.3 统计学处理 所有数据采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，计数资料比较采用卡方检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 p40、p63、CK5/6在非小细胞肺癌中表达情况见图1～3。非小细胞肺癌51例中，鳞状细胞癌20例，腺癌31例。p40、p63、CK5/6在鳞状细胞癌20例组织中阳性表达分别为 20例（100.0%），19例（95.0%)，18例（90.0%），p40和p63阳性表达率稍高于CK5/6，但三者的敏感性比较差异无统计学意义（χ2=2.070，P=0.355）；腺癌31例组织中p40、p63、CK5/6阳性表达分别为0例（0.0%）、6例（19.4%）、3例（9.7%)，p40在31例腺癌中无1例表达，特异性高于p63、CK5/6(χ2=6.424，P=0.040)，而p63、CK5/6两组间，特异性比较差异无统计学意义（P=0.458）。

2.2 TTF-1、CK7、Napsin-A在非小细胞肺癌中的表达情况 见图4～图6。非小细胞肺癌51例中，TTF-1、CK7、Napsin-A在肺腺癌31例组织中的阳性表达分别为27例（87.1%）、25例（80.6%）、28例（90.3%），Napsin-A阳性表达率稍高于TTF-1、CK7，但敏感性比较差异无统计学意义（χ2=1.238，P=0.538）；鳞状细胞癌20例组织中TTF-1、CK7、Napsin-A的阳性表达分别为1例（5.0%）、7例（35.0%）、0例（0.0%），TTF-1和Napsin-A的阳性表达率相近，两者的表达特异性高于CK7(χ2=12.197，P<0.01),并且TTF-1、NapsinA两组间，特异性比较差异无统计学意义（P= 0.317）。

3 讨 论

肺癌在我国是常见的恶性肿瘤之一，容易发生脑转移[1]。随着医疗技术的发展，越来越多的肺肿瘤进行活检或穿刺诊断。活检或穿刺标本少，并因基因治疗和新辅助化疗的出现肺腺癌可能需要进一步做

EGFR基因检测，进行基因靶向治疗。而肺鳞状细胞癌却无特异性基因靶向治疗的药物，因此选择合适的有效的联合标记抗体，正确地区分低分化腺癌与鳞状细胞癌非常重要。

图1 肺鳞状细胞癌p40阳性（SP法，200×）

图2 肺鳞状细胞癌p63阳性（SP法，200×）

图3 肺鳞状细胞癌CK5/6阳性（SP法，200×）

图4 肺腺癌TTF-1阳性（SP法，200×）

图5 肺腺癌CK7阳性（SP法，200×）

图6 肺腺癌NapsinA阳性（SP法，200×）

p40为p63基因编码翻译形成的一种蛋白，无反转录活性，其主要功能为刺激细胞增生，阻止细胞凋亡，又称为ΔNp63。p40在鳞状细胞癌组织中阳性表达，还可在正常的主支气管粘膜基底细胞、气管腺体的肌上皮中阳性表达，但在肺腺癌中不表达[2]。p63基因编码翻译还会形成另一种蛋白，具有反转录活性（TA），通过凋亡和细胞分化促进细胞周期循环，称为TAp63。肺腺癌可阳性表达TAP63。现实验室通常所用的P63抗体含有ΔNp63、TAp63两种蛋白的抗体，因此p63在部分肺腺癌中可阳性表达[2]。

TTF-1属于转录因子NKx2基因家族，是一种核转录蛋白，分子量为38KD，在肺癌中存在基因的扩增及蛋白水平的增高[3]。Napsin A是天门冬氨酸蛋白酶家族成员之一，具有蛋白水解酶活性，在Ⅱ型肺泡上皮细胞有显著表达，起到诱导蛋白前体成熟、维持肺的形态及正常功能的作用[4]。

本文中的结果显示在肺鳞状细胞癌中p40、P63、CK5/6的阳性表达率相近；三者在肺鳞状细胞癌的阳性表达敏感性方面相似，但p40、p63的表达阳性率要稍高于CK5/6。p40在肺腺癌中均阴性表达，p63在19.4%的肺腺癌病例中阳性表达，CK5/6在肺腺癌中阳性表达率为9.7%，在鳞状细胞癌表达的特异性比较，p40表达特异性高于p63和CK5/6，且差异有统计学意义,因此本文认为在鉴别诊断肺鳞状细胞癌时首选p40。

TTF-1、Napsin-A是诊断肺腺癌时常用的抗体。结果发现TTF-1、CK7、Napsin-A在肺腺癌中阳性表达率在80.6%～90.3%，在肺鳞状细胞癌中阳性表达率在0～35.0%。在肺腺癌表达的敏感性方面TTF-1、NapsinA、CK7相似，TTF-1、Napsin-A在腺癌中表达的特异性上高于CK7,三者之间差异有统计学意义。在肺腺癌组织中，癌组织的分化程度越低，则NapsinA表达的阳性率越低[7]。TTF-1在多种肺癌中包括肺小细胞癌、大细胞癌、鳞状细胞癌中都可有阳性表达[8]。本研究发现NapsinA的阳性表达敏感性与特异性均和TTF-1相似，且特异型高于CK7，且肺腺癌31例中有3例阴性表达NapsinA,20例鳞状细胞癌中有1例TTF-1阳性，故联合检测TTF-1和Napsin-A进行鉴别诊断肺低分化腺癌更有意义。

综上所述，在肺鳞状细胞癌中p40表达的特异性高于p63、CK5/6，敏感性很好；在肺腺癌中TTF-1、Napsin-A表达的特异性高于CK7，两者的敏感性亦较好。因此在非小细胞肺癌活检或穿刺标本中，有必要联合检测p40、TTF-1、Napsin-A。这样既可提高诊断正确率、快速地作出诊断，又为临床及时采取合适的治疗方法，特别是肺腺癌进一步进行基因检测、采用靶向治疗提供依据。

[1]黄敏，王欢，刘明之，等.肺癌脑转移177例临床分析[J].实用癌症杂志，2010，25（4）：384-385.

[2]Righi L,Graziano P,Fornari A,et al.Immunohistochemical subtyping of nonsmall cell lung cancer not otherwise specified in fine-needle aspiration cytology:a retrospective study of 103 cases with surgical correlation[J].Cancer,2011,117 (15):3416-3423.

[3]Perner S,Wagner PL,Soltermann A,et al.TTF1 expression in non-small cell lung carcinoma?:association with TTF1 gene amplification and improved survival[J].J Pathol,2009, 217(1):65-72.

[4]Ueno T，Linder S,Na GL，et a1．Processing of pulmonary surfactant protein B by napsin and cathepsin H[J].J Biol Chem, 2004，279(16)：16178—16184．

[5]Rekhtman N,Ang DC,Sima CS,et al.Immunohistochemical algorithm for differentiation of lung adenocarcinoma and squamous cell carcinoma based on large series of whole-tissue sectons with validation in small specimens[J].Mod Pathol, 2011,24(10):1328-1359.

[6]Yoshida A,Tsuta K,Nakamura H,et al.Comprehensive histologic analysis of ALK-rearrangde lung carcinomas[J].Am J Surg Pathol,2011,35(8),1226-1234.

[7]Chuman Y,Bergman A，Ueno T,et al.Napsin A,a member of the aspartic protease family,is abundantly expressed in normal lung and kidney tissue and is expressed in lung adenocarcinomas[J].FEBS Lett,1999,462(1-2):129-134.

[8]Zamecnik J,Kodet R.Value of thyroid transcription factor-1 and surfactant apoprotein A in the differential diagnosis of pulmonary carcinomas:a study of 109 cases[J].Virchows Arch，2002，440(4)：353-361．

p40、Napsin-A and TTF-1——the specific immunohistochemical mark to identify squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of non-small cell Lung Cancer

QIU Jiagao
（Department of Pathology，GaoYou People’s Hospital,Jiangsu 225600）

Objective:To study the significant immunohistochemical mark to identifiy squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of non-small cell lung cancer.Methods:The expression of p63,p40,CK5/6,TTF-1,CK7 and Napsin-A was detected in 51 cases with non-small cell lung cancer by using immunohistochemistry of SP.Results:In 51 cases with non-small cell lung cancer,there were 20 cases with squamous cell carcinoma and 31 cases with adenocarcinoma.The positive expression rates of p63,p40 and CK5/6 in lung squamous cell carcinoma was 100%（20/20）,95%(19/20)and 90%（18/20）respectively;the sensitivity of p63,p40 and CK5/6 was similar（P=0.355）,but the specificity of p40 was higher than that of p63 and CK5/6(P=0.040).The positive expression rate of TTF-1,CK7 and Napsin-A in lung adenocarcinoma was 87.1%（27/31）,80.6%（25/31）and 90.3%（28/31）respectively,the sensitivity of TTF-1,CK7 and Napsin-A was similar,too（P=0.538）.The specificity of TTF-1、Napsin-A was higher than that of CK7(P=0.002).Conclusion:The sensitivity of p40,Napsin-A and TTF-1 is higher in non-small cell lung cancer,and they are the specific marks to identify squamous cell carcinoma and adenocarcinoma in the lungs.Detection of p40,Napsin-A and TTF-1 together can be more accurate in differential diagnosis of non-small cell lung cancer and provides a theoretical basis for clinical treatment.

Non-small cell lung cancer；Immunohistochemistry；p40；Novel aspartic proteinase A(Napsin-A)；TTF-1

R734.2

A

仇加高，男，汉族，江苏高邮人，生于1972年9月，本科，副主任医师。研究方向：肿瘤病理。

2014-04-10

1006-2440（2014）04-0334-03

随着生活环境的改变、大气污染的加重及吸烟等其他因素的影响，肺癌的发病率在逐年上升。因为新辅助化疗技术的进步和发展，鉴别诊断非小细胞肺癌显得则越来越重要。2009年1月—2012年12月，选取我院手术切除的非小细胞肺癌标本51例，对非小细胞肺癌51例进行p40、p63、CK5/6、TTF-1、CK7、Napsin-A的研究，探讨这几种免疫组织化学标记在非小细胞肺癌中表达的敏感性和特异性，为正确诊断非小细胞肺癌找到最佳的联合标记抗体。