龚 睿，张 轶，孙何云，赵舒雅

（信阳市动物疫病预防控制中心，河南 信阳 464000）

猪细小病毒病（PPI）是由猪细小病毒（PPV）引起的猪的一种繁殖障碍病，该病主要感染母猪，引起母猪发生流产、死产、产木乃伊胎［1］。不同年龄、性别的猪均易感，感PPV的母猪和带毒的公猪是主要的传染源。我国于1982年首次分离到PPV，近年来，该病的发生和流行呈上升趋势，大部分地区均有PPI的发生［2］。PPI在规模猪场经常性暴发流行，给养猪业带来较大的经济损失，并且该病还常与免疫抑制性疾病混合感染，其危害性加大。疫苗免疫是预防PPI的有效手段，现在，大部分猪场的种猪均已进行了PPV的免疫。为了解信阳市规模猪场PPV的防疫状况，信阳市动物疫病预防控制中心组织实验室人员利用2014年春季集中免疫监测的机会，对全市部分规模猪场的PPV免疫效果进行监测评估，为该病的防控提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2014年3—5月，由各县区动物疫病预防控制中心选择免疫过PPV疫苗的规模化猪场，选取不同日龄健康猪群，通过前腔静脉或耳静脉每猪无菌采集全血3～5 mL，每个猪场采集30～40份样品，共采集血液样品1 983份，冷藏条件下送达实验室。

1.2 样品的制备

试验人员将采集的血液样品于3 000 r／min条件下离心10 min，取血清保存于1.5 mL灭菌离心管中，-20 ℃保存待检。

1.3 检测试剂及仪器设备

1.3.1 检测试剂盒

猪细小病毒ELSIA抗体检测试剂盒(批号：140809)，购自武汉科前动物生物制品有限公司。

1.3.2 仪器设备

Eppendorf 10～1 000μL单道移液器及25～300μL多道移液器（德国Eppendorf公司）；Thermo FC酶标仪（美国Thermo公司），TDZ5-WS台式低速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；303系列电热恒温培养箱（上海树立仪器仪表有限公司）。

表1 不同县区猪场细小病毒抗体合格率统计表

1.4 方法

1.4.1 PPV抗体检测酶联免疫吸附试验（ELISA）操作方法

1）取抗原包被板，分别将稀释好的待检血清和对照各取100μL加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37 ℃温育30 min。2）甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200 μL，静置3 min倒掉，再在吸水纸上拍干，反复洗涤5次。3）每孔加羊抗猪酶标二抗100μL，置 37 ℃温育 30 min。4）洗涤5次，方法同前述步骤的2）。切记每次在干净吸水纸上拍干。5）每孔先加1滴(50μL)底物液A、再加1滴(50μL)底物液B，混匀，室温(18～25 ℃)避光显色10 min。6） 每孔加终止液1滴(50μL)，10 min内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。

1.4.2 结果判定

试验成立条件，阳性对照孔平均OD630nm值≥0.6，阴性对照孔平均OD630nm值必须＜0.3。样品OD630nm值≥0.4，判为阳性，样品OD630nm值＜0.4判为阴性。

1.4.3 合格标准

群体免疫抗体合格率达到70%判定为群体合格。

表2 不同生长阶段猪群细小病毒抗体合格率统计表

2 检测结果

2.1 不同县区规模猪场PPV抗体水平情况

由表1可见，本次PPV免疫效果调查58个规模化猪场，检测样品1 983份，抗体合格1 501份，合格率为75.7%；其中，罗山县最高为84.1%，最低的光山县合格率为61.5%。

2.2 不同生长阶段PPV免疫情况

本次调查了4个生长阶段的猪群，分别是经产母猪、种公猪、后备公猪和后备母猪。由表2可见，经产母猪和种公猪抗体合格率最高，分别达到了81.1%和81.8%；后备公猪和后备母猪的合格率较低，仅为72.8%和67.6%，特别是后备母猪的合格率低于70%的抗体合格率标准。

3 分析与讨论

1)利用信阳市春季集中免疫监测的机会，开展了本次PPV免疫效果调查，采样点覆盖辖区内58个规模猪场，能够代表我市猪细小病毒的免疫情况。本次调查共监测样品1 983份，合格1 501份，合格率达到75.7%，符合国家群体合格率标准。信阳市不同县区规模猪场PPV抗体水平有差异，其中，罗山、潢川和商城的猪群抗体合格率较高，均超过了80%；淮滨县和光山县的猪群抗体合格率在70%以下。分析原因，这可能与淮滨和光山的中小规模猪场较多，饲养管理水平落后、免疫程序不科学、引种不良、养殖环境不良有较大的关系。

2)本次调查了4个不同阶段猪群PPV免疫情况，抗体合格率有差异。其中，经产母猪和种公猪群最高，分别为81.1%和81.8%；后备公猪和后备母猪的合格率为72.8%和67.6%。本研究表明，猪细小病毒抗体合格率不同猪群间存在差异，抗体合格率随养殖时间加长有增长的趋势。种猪抗体水平较高，后备阶段猪群抗体水平较低，分析出现这种情况的原因：种猪饲养周期长，免疫次数较多；部分猪场后备猪在2月龄以后才开始免疫。

3) PPI是母猪繁殖障碍性疾病，给生猪养殖带来较大危害，该病特点是：发病率高，传播快，而且容易引起继发感染。目前，PPV现阶段尚无有效的治疗措施，预防该病主要手段是进行免疫接种。近几年来由于疫苗品质、免疫抑制性疾病和霉菌毒素等多方面的原因，PPV疫苗免疫失败的现象时有发生。猪场要想获得好的免疫效果，须从以下几点着手：加强饲养管理，提高猪群健康水平；高度重视PPV疫苗质量，选择安全、高效、口碑好的疫苗，采用合适的免疫剂量、免疫程序，免疫后及时检测，了解猪群的免疫效果，查找免疫措施的不足，确保免疫能够对猪起到保护作用；加强对引进种猪的隔离和检疫工作，杜绝阳性种猪的混群；加强对猪群的检测，发现病毒感染及免疫抑制猪，立即淘汰；要有效控制PPV，坚持自繁自养，做好种猪群PPV的免疫净化工作。

[1] 蔡宝祥.家畜传染病学［M］.4版.北京：中国农业出版社，2001：209-211.

[2] 李祥峰，高洪，严玉霖，等. 楚雄部分地区猪细小病毒感染的血清学调查[J].动物医学进展，2013(8)：130-132.