程丰伟，李 磊，王 芳，金 锐，罗 欣，张胜权

◇基础医学研究◇

Gardiquimod对HepG2细胞中VEGF和TIMP1表达的影响

程丰伟，李 磊，王 芳，金 锐，罗 欣，张胜权

目的研究Toll样受体7（TLR7）的配体Gardiquimod 对HepG2细胞中血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP1）mRNA表达的影响，并分析其激活的信号通路。方法HepG2细胞经不同时间的Gardiquimod（2 μg／ml）处理后，提取细胞总RNA和总蛋白，RT-PCR分析VEGF和TIMP1转录水平的变化；Western blot分析丝裂原蛋白激活激酶－胞外信号调节激酶（MAPKs-ERK1／2）信号通路，并通过MAPKs-ERK1／2特异性阻断剂PD98059阻断相应的信号途径，进而分析两者的相关性。结果HepG2细胞中表达TLR7，但较外周血单个核细胞（PBMC）较少。Gardiquimod刺激HepG2 10 min后下调细胞中VEGF mRNA的表达，而刺激细胞30 min后TIMP1 mRNA的表达有明显的上调；Western blot结果显示，细胞中的ERK1／2的磷酸化水平明显降低；并且ERK1／2的特异性抑制剂（PD98059）能有效抑制HepG2细胞中ERK1／2磷酸化作用。结论TLR7激活能够下调HepG2细胞中VEGF的表达，并与ERK1／2信号通路相关；同时TLR7激活上调TIMP1的表达，但与ERK1／2信号通路无相关性。

TLR7；VEGF；TIMP1；HepG2；Gardiquimod

Toll样受体（Toll-like receptors，TLRs）是一类重要模式识别受体（patternrecognition receptors，PRR），不仅参与先天性免疫，而且在获得性免疫中也发挥重要作用。TLR7能识别某些天然小分子抗病毒化合物和病毒单链RNA（single-stranded RNA，ssRNA），激活髓系分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）依赖的信号通路，介导抗病毒免疫反应［1］。并且，TLR7亦可识别一些人工合成的咪唑喹啉类或鸟苷酸衍生物类的小分子化合物，如R848和Gardiquimod等。近年来研究［2］显示TLR7不仅仅表达于免疫细胞，而且在部分癌细胞中也有表达，特别在血液肿瘤以及皮肤肿瘤中关于TLR7的研究常见报道，具体作用尚不明确，但TLR7与肿瘤的发生、迁移等密切相关。研究［3］显示TLR7激活后具有促某些抗肿瘤的细胞因子表达，并对某些肿瘤的侵袭、转移有一定抑制作用。……