吴 颖,王秀娣,曹淑彦,郑晓群

(1.温州医科大学附属第二医院科研中心;2.温州医科大学检验与生命科学学院,浙江 温州 325000)

甲状腺乳头状癌为临床常见甲状腺肿瘤之一，据相关研究报道[1]，32%甲状腺乳头状癌患者检测出RET/PTC基因重新排列，乳头状癌细胞株中存在BRAF基因突变情况，其中甲状腺乳头状癌中的突变率较高，未发现其存在于良性甲状腺病变及其它恶性甲状腺肿瘤中。本文以106例甲状腺肿瘤以及结节性甲状腺肿患者作为研究对象，研究探讨甲状腺乳头状癌BRAF基因突变及表达的临床意义，现总结如下，仅供业内参考。

一、资料与方法

(一)一般资料。

随机抽取106例甲状腺肿瘤以及结节性甲状腺肿患者作为研究对象，其中滤泡状癌18例，乳头状癌58例，结节性甲状腺肿25例，甲状腺腺瘤5例，所有患者均经临床诊断符合研究条件，观察组患者男13例，女45例，患者平均年龄41.2±1.3岁，对照组男10例，女38例，患者平均年龄42.1±1.1岁，两组患者在性别年龄等方面无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。

(二)方法。

选用高保真PCR试剂盒(Fermentas公司)、PCR扩增仪(德国Eppendorf公司)，胶回收纯化试剂(Fermentas公司)、DNA markers，高速离心机(德国Sigma公司生产)。(1)提取DNA。①选择5m厚的石蜡切片5-10张放入1.5mlEppendorf管中，滴加1ml二甲苯脱蜡，10分钟后使用高速离心机10000r/min离心10分钟，滤去上清重复离心一次；②滴加1ml无水乙醇清洗5-10分钟，重复上述离心操作两次；③置37℃干燥组织，清除无水乙醇；④取500μl消化液，滴入2.5μl蛋白酶K，煮沸灭活蛋白酶K；⑤采用离心机10000r/min离心10分钟，取上清液即DNA，加入异戊醇抽提，12000r/min离心10分钟，沉淀选择体积分数为70%的乙醇清洗一次，采用双蒸水溶解，将获取的DNA置于﹣20℃的环境内保存备用。(……