高效液相色谱法测定藿香正气胶囊中橙皮苷含量的分析

2014-01-23谷海玲

中国现代药物应用 2014年11期

谷海玲

谷海玲

目的探讨高效液相色谱法测定藿香正气胶囊中橙皮苷的含量。方法应用高效液相色谱方法, 检测藿香正气胶囊中橙皮苷含量。结果橙皮苷在10.0～101 μg/ml范围具有良好线性关系, 回归方程为Y=0.2931, X=0.1642, R=0.9999, 平均回收率为100.62%(RSD=1.2%)。结论高效液相色谱法测定方法具有较高简便性、快速性、准确性, 可以避免干扰, 保持较高重复性和稳定性, 对于藿香正气胶囊质量控制具有重要作用。

橙皮苷；高效液相色谱法；含量

藿香正气胶囊属于一种中药复方制剂, 主要成分包括广藿香油、紫苏叶油、生半夏、陈皮、白术、茯苓等。传统方法中, 藿香正气软胶囊和藿香正气水有厚朴酚与和厚朴酚含量测定项。高效液相色谱法对于中药陈皮橙皮苷含量测定方法具有较高准确性, 现报告如下。

1 仪器与药物

高效液相色谱仪、电子天平、紫外分光光度计。橙皮苷对照品、甲醇、醋酸。

2 方法

2.1色谱柱应用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂DiamosilTM(钻石), 5.0 μm, 200 mm×4.6 mm；流动相应用甲醇-0.5%醋酸溶液(30:70), 其流速为1.0 ml/min;检测波长为284 nm。总理论板数根据橙皮苷峰计算≥2000［1］。

2.2对照品溶液制备准确称取橙皮苷对照品适量, 加入甲醇制成每1.0 ml含橙皮苷40 μg溶液, 可以得到对照品溶液。

2.3供试品溶液制备称量本品装量差异项下内容物0.35 g,经严格称定, 放置到锥形瓶内, 准确加进入醇50 ml, 并准确称其重量, 经超声处理45 min, 功率保持120 W, 频率设定为40 kHz, 将其放置冷却后, 密闭塞紧, 准确称量重量, 且以甲醇将减掉重量补全, 摇晃均匀, 滤过处理后, 收集续滤液, 则可得到。

2.4阴性对照液制备制备不含有陈皮样品, 根据供试品溶液制备法制备好阴性对照液。

在测定时, 分别准确取用对照品溶液与供试品溶液及阴性对照液各10 μl, 将其分别注入液相色谱仪内进行检测。

2.5专属性试验将不含有陈皮的藿香正气胶囊阴性样品,根据溶液制备方法制备供试品溶液, 并实施有效测定。结果避免阴性样品HPLC色谱图在与橙皮苷对照品同样保留时间处无色谱峰, 由此可知藿香正气胶囊内其他药味及辅料等对橙皮苷测定并无干扰性。

2.6线性范围考察［2］分别准确量取橙皮苷对照品储备液(202 μg/ml)实施梯度稀释, 然后呈现橙皮苷为10、20、25、40、50、100 μg/ml对照品溶液, 依次进样10 μl, 观察色谱图,检测峰面积, 得到进样浓度(μg/ml)与峰面积A依次为10.1、2.8721；20.2、5.7521；25.25、7.2140；40.40、11.5132；50.50、14.8123；101.00、29.4126。由此可知, 进样浓度在10.0～101 μg/ml时, 橙皮苷峰面积与进样浓度具有理想线性关系。

2.7精密度试验应用同一种供试品溶液, 相同进样量, 持续性进样6次, 根据试验条件进行测定, 橙皮苷峰面积分别为 14.5926、14.6242、14.6412、14.5995、14.6231、14.6721,平均峰面积为14.6254, RSD为0.18%。

2.8稳定性试验应用同一种供试品溶液, 根据溶液制备方法, 色谱条件分别为0、3、6、9、12、24 h实施测定。橙皮苷峰面积分别为14.3678、14.4941、14.5582、14.6534、14.7215、14.9426, 平均峰面积为14.6229。样品内橙皮苷峰面积相对标准偏差RSD为1.4%, 在24 h内保持稳定性。

2.9重复性试验根据拟定含量测定方法, 对同一种批号样品实施平行试验, 根据方法进行测定。测定6次, 橙皮苷峰面积分别为14.4035、14.2931、14.4881、14.4632、14.5623、14.5275, 平均峰面积为14.4563, RSD为0.67%。

2.10回收率试验应用加样回收方法, 并应用以上重复性试验时所使用的样品, 取9份, 均为0.15 g, 进行严格称量, 分别放置不同量橙皮苷对照品, 根据拟定含量测定方法进行制备, 并进行准确测量, 计算回收率。9次测量主要为：①取样量0.1503 g, 测得量2.6341 mg, 加入量1.21 mg, 回收率99.04%；②取样量0.1502 g, 测得量2.7935 mg, 加入量1.39 mg,回收率99.72%；③取样量0.1504 g, 测得量2.6338 mg, 加入量1.20 mg, 回收率99.12%；④取样量0.1501 g, 测得量2.8462 mg,加入量1.39 mg, 回收率101.25%；⑤取样量0.1507 g, 测得量3.0095 mg, 加入量1.54 mg, 回收率100.68%；⑥取样量0.1505 g, 测得量3.2654 mg, 加入量1.89 mg, 回收率101.87%；⑦取样量0.1503 g, 测得量2.6341 mg, 加入量1.21 mg, 回收率99.04%；⑧取样量0.1505 g, 测得量3.3849 mg, 加入量1.92 mg, 回收率101.69%；⑨取样量0.1505 g, 测得量3.3855 mg,加入量1.91 mg, 回收率101.98%。平均回收率为100.72%, RSD为1.2%。

2.11样品测定按照准确方法测定6个不同批次样品, 检测结果显示, 样品内橙皮苷平均含量为9.55 mg/g, RSD为0.24%(n=5)。检测结果显示其重复性试验效果良好。