张 亮，付崇罗

常规的膜片钳技术采用负压抽吸或电击破膜形成全细胞模式。在此过程中，电极内液和细胞内液之间的扩散交换常使一些受胞内物质调控的通道电流出现时间依赖性的衰减。1988年Horn等［1］对传统全细胞记录进行了改进，建立了穿孔膜片钳技术（perforated-patch clamp）：即利用某些抗生素具有在生物膜上形成通透性孔道的性质，将这类抗生素充灌在电极液中，在高阻封接形成之后自发性形成的全细胞模式。

海德氏突触（calyx）位于哺乳动物听觉脑干斜方体中核区，是一个巨大的谷氨酸能化学突触，越来越多的被用于中枢神经系统（CNS）突触机制的研究［2］。本研究室在小鼠calyx细胞上研究突触囊泡释放机制，然而在常规全细胞膜片钳记录时，易引起细胞内物质流失，影响细胞内环境的稳定，从而可能导致记录的失真，尤其是在要求长时间记录的实验中。而穿孔膜片钳技术应用amphotericin B在细胞膜上形成特定的孔道，选择性地允许一些离子和大分子物质通过，保持了电学连续性，从而使细胞内环境保持相对稳定，在一定程度上弥补了上述缺陷，实验成功率也相应提高，为深入开展后续的工作提供技术平台。

1 材料与方法

1.1 脑片的制备

本实验使用7-9日龄的 C57BL6小鼠，发育正常，雌雄不限。制备含有听觉脑干斜方体中核区组织脑片，厚度200μm。脑片置于盛有Bath溶液并通有二元气（95%O2＋5%CO2）的水浴槽中，37℃温浴30 min。

1.2 电极拉制和电极液灌注

微管电极是由电极拉制仪（MODEL P-2000，USA）拉制而成，充灌电极液后，电极尖端阻值为2～4 MΩ。……