荀文娟，侯冠彧，周汉林，施力光，曹 婷

（中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，海南儋州571737）

Kiss－1基因于1996年被发现，并被鉴定为转移抑制基因，在具有不同转移能力的黑色素瘤细胞中表达存在差异［1］。随后该基因编码的产物kisspeptin被发现，G 蛋白偶联受体54（G protein－coupled receptor 54，GPR54）是kisspeptin 的受体。在人、牛、羊、鼠等哺乳动物研究发现，Kiss－1 基因与GPR54基因一起组成Kiss－1／GPR54系统，参与动物下丘脑－垂体－性腺轴功能的调节［2］。Lents等［3］研究发现，脑室内注射Kisspeptin后备母猪初情日龄提前。Tomikawa等［4］也在初情期母猪下丘脑中检测到Kiss－1基因高水平表达，表明下丘脑Kiss1／GPR54可能是母猪初情启动的关键调节基因。鉴于Kiss－1基因在初情期启动调控中的重要性，本研究推测Kiss－1基因可能与五指山猪高繁殖力和性早熟有关。一直以来，中国地方品种猪的高繁殖能力始终是中外学者的研究热点。五指山猪产于海南省，是我国体型最小、体重最轻的珍稀品种，具有繁殖率高、性成熟早等特性［5］。

本试验以五指山猪作为研究对象，检测Kiss－1／GPR54系统在不同发育阶段五指山猪下丘脑中的表达，从而为阐明动物生殖机理和早熟品种选种选育提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物

选取日龄相近、健康、无生殖缺陷五指山母猪16头，分别于30、60、90（初情期）和120日龄屠宰，采集血清和下丘脑组织样品，血清样品于－20 ℃冰箱保存，组织样品液氮速冻，－70 ℃冰箱保存备用。

1.2 试剂与仪器

RNAiso Plus 总RNA 提取试剂、反转录试剂盒、荧光定量PCR 试剂盒（SYBR R Premix Ex TaqTM）购自Takara；荧光定量PCR 仪购自eppendorf。

1.3 总RNA 的提取及cDNA 第一链合成

采用TaKaRa公司RNAiso Plus试剂盒提取总RNA。……